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xiangquanju金蟲 (小有名氣)
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[求助]
絕對(duì)定量PCR中標(biāo)準(zhǔn)品的疑問? 已有4人參與
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要做一個(gè)功能基因的絕對(duì)定量,樣品有廢水,土壤,大概40多個(gè) 現(xiàn)在要做標(biāo)準(zhǔn)曲線,打算用含有目的基因的質(zhì)粒做模板,有個(gè)疑問請(qǐng)教一下大家,我是不是可以只從某一樣品中擴(kuò)增這個(gè)功能基因,轉(zhuǎn)化質(zhì)粒用來做標(biāo)準(zhǔn)品!因?yàn)榭紤]到不同物種之間基因序列也有微小的差別,這種差別是不是可以忽略 選擇這個(gè)某一樣品用來擴(kuò)增這個(gè)功能基因的時(shí)候,有沒有需要注意的地方! 做熒光定量PCR的新手,望大家多指教 |
新蟲 (初入文壇)
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同學(xué),我也遇到了同樣的問題,要用絕對(duì)熒光定量檢測(cè)豬和小鼠某個(gè)功能基因的表達(dá)量,不知到符合原理嗎,畢竟引物不同。同學(xué),你怎么解決的,求教。謝謝,一定要聯(lián)系我,604867048,謝謝你 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
木蟲 (正式寫手)
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1.內(nèi)參基因一般不會(huì)只選擇一個(gè) 多選擇幾個(gè)吧,如果做真核的一般我們選B-actin,GAPDH,GUS...等 原核的話,你自己看看文獻(xiàn),選擇幾個(gè)內(nèi)參 2.提醒一下,你構(gòu)建的質(zhì)粒,最后要切成線性 3.你檢測(cè)的是很多樣品中的某一個(gè)特定微生物物種的特定的某個(gè)/些基因,理論上可以從某個(gè)樣品中擴(kuò),但最好如果有純種微生物樣品的DNA豈不是更好,減少干擾。 |

木蟲 (正式寫手)

金蟲 (小有名氣)
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