 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 602 | 回復(fù): 4 | ||
mf書蟲銀蟲 (初入文壇)
|
[求助]
急求PCR相關(guān)知識
|
|
求助PCR注意要點，尤其是退火溫度和時間對PCR的影響，延伸時間和片段長短的關(guān)系。 我做的全基因檢測，有一個基因別人退火時間30s就能跑出來，我的要1分30s才能有，大約一千bp，我想知道退貨時間這么長會不會有什么影響 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
291求調(diào)劑
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
材料學(xué)碩333求調(diào)劑
已經(jīng)有17人回復(fù)
-
070300化學(xué)求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
070300一志愿211，312分求調(diào)劑院校
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
物理學(xué)調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
08工科，295，接受跨專業(yè)調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
材料科學(xué)與工程調(diào)劑
已經(jīng)有12人回復(fù)
-
本2一志愿C9-333分，材料科學(xué)與工程，求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
一志愿西交288化工專碩求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
308求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 求解pcr目的條帶拖帶
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 求助，這2張圖可以是什么熒光PCR圖��？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- PCR重復(fù)不出來啊，求助啊
已經(jīng)有7人回復(fù)
- PCR出現(xiàn)這樣的問題，如何解決？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 急求熒光實時定量PCR內(nèi)參法實驗步驟，最好能給我一篇詳細點的論文
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 關(guān)于QRT-PCR樣本處理
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 定量PCR擴增曲線求助，急求
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 急求:PCR 產(chǎn)物連接轉(zhuǎn)化 涂板后就是不長 到底是怎么回事啊
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 單鏈DNA大小為100np,PCR后跑電泳，條帶在200bp左右是怎么回事？求助！！
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 求助~~~~~PCR產(chǎn)物條帶分析
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 相對定量PCR對照組的bar問題，急求解答，在線等！
已經(jīng)有14人回復(fù)
- RT-PCR結(jié)果分析求助
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 逆轉(zhuǎn)錄-pcr圖，就解
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 有誰做過細菌的PCR實驗嗎？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- PCR：關(guān)于EB的問題！
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 質(zhì)粒PCR后瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果問題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- PCR重復(fù)不出來
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 急求解！Pcr循環(huán)數(shù)問題...
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 急求RT-PCR電泳圖分析
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 有關(guān)定量PCR，急急急
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】RT-PCR的數(shù)據(jù)處理
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR Mix如何選擇？急~~
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】瓊脂糖凝膠電泳檢測pcr產(chǎn)物
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】目的基因PCR后電泳出現(xiàn)多條帶
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】求助PCR雜帶過多！
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】genome walker PCR
已經(jīng)有7人回復(fù)
鯨魚先生
木蟲 (著名寫手)
一條大魚
- 博學(xué)EPI: 1
- 應(yīng)助: 75 (初中生)
- 金幣: 2023
- 散金: 34
- 紅花: 13
- 沙發(fā): 1
- 帖子: 1718
- 在線: 202.2小時
- 蟲號: 882772
- 注冊: 2009-10-24
- 性別: GG
- 專業(yè): 金屬功能材料
2樓2014-04-09 23:56:58
mf書蟲
銀蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 53.5
- 帖子: 18
- 在線: 5.7小時
- 蟲號: 2164716
- 注冊: 2012-12-04
- 專業(yè): 獸醫(yī)免疫學(xué)
3樓2014-04-10 14:40:16
煉獄之火
至尊木蟲 (知名作家)
逆水行舟，不進則退
- 博學(xué)EPI: 52
- 應(yīng)助: 258 (大學(xué)生)
- 貴賓: 0.228
- 金幣: 13217.6
- 散金: 1402
- 紅花: 44
- 沙發(fā): 4
- 帖子: 6185
- 在線: 787.9小時
- 蟲號: 2862838
- 注冊: 2013-12-11
- 專業(yè): 催化化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
|
其實PCR的退火溫度和時間是根據(jù)你的引物和目的片段大小而定的。 時間短一些可以得到更好的效果. 因為, polymerase 在 AT(退火溫度）.時也會有一些活性. 所以在A.T.的時間過長, 會極大的增加非特異性擴增的風(fēng)險。 退火溫度和片段長度相關(guān)，片段長退火時間長一些，一般2min也可以的 預(yù)變性和變性的時間是由模板的長度和GC含量來確定的，當(dāng)然這個時間并不像退火溫度那樣有個可以參考的計算公式，一般來講預(yù)變性95℃，5min完全可以解開模板的雙鏈，如果模板分子量比較大（比如是從基因組DNA中進行擴增，那時間延伸到10min也是可以的），變性時間通常也是30S足夠了，也可以根據(jù)擴增片段長度（是擴增片段長度而不是原始模板長度）和GC含量進行微調(diào)。 退火是為了讓引物與模板結(jié)合，一般來講30s足夠了，如果退火時間延長那么引物在酶的作用下就會進行擴增反應(yīng)，因此在擴增比較短的片段時通常會把退火和延伸步驟合并（即所謂的兩步法擴增） |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
mf書蟲4樓2014-04-10 18:04:58
mf書蟲
銀蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 53.5
- 帖子: 18
- 在線: 5.7小時
- 蟲號: 2164716
- 注冊: 2012-12-04
- 專業(yè): 獸醫(yī)免疫學(xué)
5樓2014-04-15 08:33:27
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 mf書蟲 的主題更新
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +6 | 邱gl 2026-03-30 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +3 | 小熊～～ 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 圖鑒212 2026-03-30 | 3/150 |
|
|
|
[有機交流]
 甲基亞磺磺酸鈉和甲基磺酸酯反應(yīng)機理
 10+3
|
kaobao456 2026-03-29 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 哈爾濱工業(yè)大學(xué)材料與化工專碩378求調(diào)劑 +3 | 塔比烏斯 2026-03-30 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué) 296 求調(diào)劑 +5 | 朵朵- 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 各位老師好，我的一志愿為北京科技大學(xué)085601材料專碩 +10 | Koxui 2026-03-28 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 324求調(diào)劑 +9 | hanamiko 2026-03-26 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 生物技術(shù)與工程 +7 | 1294608413 2026-03-25 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 085404求調(diào)劑，總分309，本科經(jīng)歷較為豐富 +6 | 來財aa 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +10 | 蛋黃咸肉粽 2026-03-26 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料與化工304求B區(qū)調(diào)劑 +4 | 邱gl 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑，求導(dǎo)師收 +9 | 天天好運來上岸?/a> 2026-03-24 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 394求調(diào)劑 +3 | 好事多磨靜候佳?/a> 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 266分，求材料冶金能源化工等調(diào)劑 +7 | 哇呼哼呼哼 2026-03-27 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿上海理工能源動力（085800）310分求調(diào)劑 +3 | zhangmingc 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 打過很多競賽，085406控制工程300分，求調(diào)劑 +3 | askeladz 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料專碩 335 分求調(diào)劑 +4 | 拒絕冷暴力 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 考研一志愿蘇州大學(xué)初始315（英一）求調(diào)劑 +3 | sbdksD 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 277分求調(diào)劑，跨調(diào)材料 +3 | 考研調(diào)劑lxh 2026-03-24 | 3/150 |
|