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wangweijian金蟲 (小有名氣)
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[求助]
目的基因是否從質(zhì)粒上掉落下來 已有3人參與
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| 工程菌提取質(zhì)粒，跑電泳可以看到質(zhì)粒條帶很亮，但是做PCR驗證質(zhì)粒里面是否含有目的基因時，幾乎沒有PCR產(chǎn)物，是不是目的基因從質(zhì)粒上掉落了？ |
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wangweijian: 金幣+3, ★★★很有幫助, 可能是高濃度的質(zhì)粒會抑制PCR反應(yīng)，我稀釋下看看 2014-04-12 10:14:20
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哈哈，那質(zhì)粒為啥就喜歡把你的片段丟了？？。。。它怎么知道你的片段長在哪？你的片段兩側(cè)有同源序列嗎？即便有，常規(guī)分子克隆的宿主菌都是重組缺陷型的，一些病毒載體因為必須帶上LTR，也沒見全部丟掉的。 質(zhì)粒PCR沒有產(chǎn)物，得看你有沒有陽性對照。 再說，既然質(zhì)粒都抽出來了，最好酶切鑒定。這個是金標(biāo)準(zhǔn)。 另，質(zhì)粒相容不相容，主要取決于復(fù)制子，跟質(zhì)粒的其他元件無關(guān)。 |
3樓2014-04-11 14:14:30
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4樓2014-04-11 14:25:49
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5樓2014-04-11 14:32:05
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