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wangweijian金蟲 (小有名氣)
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[求助]
目的基因是否從質粒上掉落下來 已有3人參與
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| 工程菌提取質粒，跑電泳可以看到質粒條帶很亮，但是做PCR驗證質粒里面是否含有目的基因時，幾乎沒有PCR產物，是不是目的基因從質粒上掉落了？ |
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for5
木蟲 (正式寫手)
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2樓2014-04-11 13:42:42
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感謝參與，應助指數 +1
wangweijian(myprayer代發(fā)): 金幣+2, 贈人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-04-11 14:35:48
wangweijian: 金幣+3, ★★★很有幫助, 可能是高濃度的質粒會抑制PCR反應，我稀釋下看看 2014-04-12 10:14:20
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哈哈，那質粒為啥就喜歡把你的片段丟了？？。。。它怎么知道你的片段長在哪？你的片段兩側有同源序列嗎？即便有，常規(guī)分子克隆的宿主菌都是重組缺陷型的，一些病毒載體因為必須帶上LTR，也沒見全部丟掉的。 質粒PCR沒有產物，得看你有沒有陽性對照。 再說，既然質粒都抽出來了，最好酶切鑒定。這個是金標準。 另，質粒相容不相容，主要取決于復制子，跟質粒的其他元件無關。 |
3樓2014-04-11 14:14:30
Neo2000
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5樓2014-04-11 14:32:05
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