 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 3659 | 回復(fù): 17 | ||
檸檬可樂星新蟲 (小有名氣)
|
[求助]
PCR產(chǎn)物做克隆，菌液涂平板后長得很慢是什么原因？ 已有5人參與
|
|
|
各位大蝦：我現(xiàn)在要把PCR產(chǎn)物做克隆，菌復(fù)壯后（37℃搖菌1h），4000rpm離心數(shù)秒，留下約300ul的菌液，吹打均勻，取20-30ul涂平板，37℃培養(yǎng)17h左右菌落還是比較小，而且菌落數(shù)量并不多，請問可能會是什么原因�。� ps：我之前做克隆，到這一步，情況是菌落密密麻麻還很小，這次減少了涂平板的菌液量，菌落是少了，但還是長得那么慢。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有239人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 菌液PCR出現(xiàn)問題了
已經(jīng)有23人回復(fù)
- 挑單克隆后搖菌搖不起來的問題
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 菌液PCR的假陽性是什么原因造成的？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 克隆涂平板37℃培養(yǎng)一夜之后，菌落密密麻麻并且特別小是什么原因？
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 急求:PCR 產(chǎn)物連接轉(zhuǎn)化 涂板后就是不長 到底是怎么回事啊
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 構(gòu)建載體后，菌液PCR，沒有目的條帶�。。�
已經(jīng)有10人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物不做純化和膠回收，直接TA克隆可以嗎？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 直接PCR產(chǎn)物轉(zhuǎn)化的克隆新方法，不需要限制酶和連接酶（正式出版pdf版）
已經(jīng)有78人回復(fù)
- 克隆菌液涂平板培養(yǎng)12個小時后不長菌，除了感受態(tài)的問題，還有哪些原因嗎？謝謝
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 做單克隆測序是菌液好還是菌液PCR后測好?
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 關(guān)于克隆技術(shù)——pcr產(chǎn)物測序問題
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 挑單克隆后，菌液PCR檢測所有條帶都偏小，目的條帶沒有出現(xiàn)
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 菌液PCR產(chǎn)物電泳圖，怎么解釋？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 我做TA克隆，準備拿序列去測序。做完轉(zhuǎn)化以后直接做個菌液PCR檢驗一下是否有目的
已經(jīng)有31人回復(fù)
- 轉(zhuǎn)化后菌液PCR鑒定，沒有目的條帶
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 菌液PCR出現(xiàn)雜帶是什么原因？
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 求幫忙分析下菌液PCR檢測結(jié)果
已經(jīng)有19人回復(fù)
- TA克隆遇到的問題
已經(jīng)有10人回復(fù)
- pcr產(chǎn)物測序和克隆之后重組質(zhì)粒測序結(jié)果一樣嗎？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】大腸桿菌菌液，如何再擴增？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】菌液PCR鑒定陽性克隆時，總出現(xiàn)CK
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】菌液PCR結(jié)束，肉眼直接看到條帶可能不？
已經(jīng)有15人回復(fù)
鬼羽帝魂
木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 183 (高中生)
- 金幣: 3100.2
- 散金: 19
- 紅花: 12
- 帖子: 1427
- 在線: 186.8小時
- 蟲號: 2538789
- 注冊: 2013-07-09
- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵回帖交流！ 2014-04-14 17:24:31
檸檬可樂星: 金幣+2 2014-04-15 16:12:17
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵回帖交流！ 2014-04-14 17:24:31
檸檬可樂星: 金幣+2 2014-04-15 16:12:17
|
這個應(yīng)該跟感受態(tài)有關(guān)系。DH5a的感受態(tài)37度12小時左右就挺大的了，10小時就可以挑。 我一般做DH5a是菌復(fù)壯后（37℃搖菌40-50min），6000rpm離心數(shù)秒，留下約100ul的菌液，吹打均勻涂平板，37℃培養(yǎng)至長得比較大。一般為12小時。 |
2樓2014-04-14 17:10:26
檸檬可樂星
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 2268.5
- 散金: 175
- 紅花: 2
- 帖子: 250
- 在線: 48.1小時
- 蟲號: 2414119
- 注冊: 2013-04-12
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
|
我一直用的這個體系，從最后結(jié)果來看，效果還是不錯滴，你可以試試啊 不是pcr過夜，是把配好的連接體系放到pcr儀里，程序設(shè)置成16℃（僅此一步）時間嘛我都是設(shè)成∞，到時候自己收就是了，你晚上做了早上收，不就過夜啦。 今天我的測序結(jié)果出來了，還不錯，都測出來了，之前挑的單克隆大部分也都是陽性的，菌落雖然小點兒但是結(jié)果還不錯。 你在挑菌的時候，要撿大小合適（不要太大的）、遠離菌落群的單菌落，還有你最后菌落PCR的時候，最好用自己的特異性引物做，降低假陽性的幾率。 連接、轉(zhuǎn)化每一步都嚴格把關(guān)，總會成功的 祝你好運 |
15樓2014-04-18 19:20:36
yuren2009
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 113 (高中生)
- 金幣: 5670.8
- 散金: 96
- 紅花: 3
- 帖子: 806
- 在線: 294.9小時
- 蟲號: 2008028
- 注冊: 2012-09-17
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物病理學(xué)
3樓2014-04-14 17:32:17
Neo2000
木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 639 (博士)
- 金幣: 8720.2
- 紅花: 37
- 帖子: 1700
- 在線: 269.3小時
- 蟲號: 322365
- 注冊: 2007-03-11
- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
4樓2014-04-14 18:18:15
檸檬可樂星
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 2268.5
- 散金: 175
- 紅花: 2
- 帖子: 250
- 在線: 48.1小時
- 蟲號: 2414119
- 注冊: 2013-04-12
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
5樓2014-04-15 16:08:55
檸檬可樂星
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 2268.5
- 散金: 175
- 紅花: 2
- 帖子: 250
- 在線: 48.1小時
- 蟲號: 2414119
- 注冊: 2013-04-12
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
6樓2014-04-15 16:10:15
檸檬可樂星
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 2268.5
- 散金: 175
- 紅花: 2
- 帖子: 250
- 在線: 48.1小時
- 蟲號: 2414119
- 注冊: 2013-04-12
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
7樓2014-04-15 16:12:01
yuren2009
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 113 (高中生)
- 金幣: 5670.8
- 散金: 96
- 紅花: 3
- 帖子: 806
- 在線: 294.9小時
- 蟲號: 2008028
- 注冊: 2012-09-17
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物病理學(xué)
8樓2014-04-15 16:32:48
9樓2014-04-15 18:45:07
檸檬可樂星
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 2268.5
- 散金: 175
- 紅花: 2
- 帖子: 250
- 在線: 48.1小時
- 蟲號: 2414119
- 注冊: 2013-04-12
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
10樓2014-04-15 21:23:43
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 檸檬可樂星 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 本人考085602 化學(xué)工程 專碩 +21 | 不知道叫什么！ 2026-03-15 | 23/1150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +10 | Faune 2026-03-21 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 初試 317 +7 | 半拉月丙 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +13 | 冬十三 2026-03-15 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 326求調(diào)劑 +5 | 諾貝爾化學(xué)獎覬?/a> 2026-03-15 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 考研化學(xué)學(xué)碩調(diào)劑，一志愿985 +5 | 張vvvv 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料工程專碩 348分求調(diào)劑 +3 | 冬辭. 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 278求調(diào)劑 +9 | 煙火先于春 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)一志愿985，分數(shù)349求調(diào)劑 +3 | zxts12 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 南京大學(xué)化學(xué)376求調(diào)劑 +3 | hisfailed 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +4 | 一志愿京區(qū)211 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 藥學(xué)383 求調(diào)劑 +3 | 藥學(xué)chy 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交通 專碩 材料355 本科雙非 求調(diào)劑 +5 | 西南交通專材355 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿 南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩 +5 | @taotao 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0856調(diào)劑，是學(xué)校就去 +8 | sllhht 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考博] 招收博士1-2人 +3 | QGZDSYS 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[論文投稿]
申請回稿延期一個月，編輯同意了。但系統(tǒng)上的時間沒變，給編輯又寫郵件了，沒回復(fù)
 10+3
|
wangf9518 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +3 | 淇ya_~ 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] [導(dǎo)師推薦]西南科技大學(xué)國防/材料導(dǎo)師推薦 +3 | 尖角小荷 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 中科院材料273求調(diào)劑 +4 | yzydy 2026-03-15 | 4/200 |
|