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314243568銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
真菌基因敲出抗生素假陽性問題！
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細(xì)菌，比如大腸桿菌，解淀粉芽孢桿菌等基因敲出很容易，而且用Amp等抗生素篩選標(biāo)記出現(xiàn)的假陽性比例相當(dāng)?shù)汀?br />
但是，對于真菌來說，這個就是一個頭疼的問題，比如煙曲霉，黑曲霉等菌株，用潮霉素做篩選標(biāo)記，正常情況下無標(biāo)記的菌株是不能在含有抗生素的平板上生長的，抗性標(biāo)記的質(zhì)粒線性化后電轉(zhuǎn)原生質(zhì)體后涂板篩選，按道理長出來應(yīng)該基本上都是成功整合上基因組（不管整合正確與否）， 問題就在于此，這一群篩選出來的轉(zhuǎn)化子重新轉(zhuǎn)接到含有潮霉素抗性的平板上基本上都能夠很好的生長（有對照，對照不長），這也就證明了其導(dǎo)入了潮霉素抗性基因，但是PCR驗(yàn)證結(jié)果顯示全部error，基因組中無潮霉素基因片段。 這一情況我一直想不通，難道和潮霉素抗性機(jī)理相關(guān)？但是在黑曲霉中，我們也用了營養(yǎng)缺陷型菌株，結(jié)果相同。不知道同行們有什么能夠建議的，還望不吝賜教！ |
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2樓2014-08-01 11:26:05
jdhdragon
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