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zhou325912銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
酶活測(cè)定和標(biāo)準(zhǔn)曲線 已有1人參與
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現(xiàn)測(cè)定有一種胞內(nèi)酶（作用底物產(chǎn)銨根離子）的酶活，步驟如下： 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：稱取過(guò)夜干燥的硫酸銨0.66g，定容到100ml.也就是100mmol/L的銨根離子，然后以此為原液，配制0.5、1、1.5、2、2.5umol/mL的梯度液，取250uL的標(biāo)準(zhǔn)梯度液先在37℃放置20min，再加顯色劑I和II各500uL。再在37℃放置20分鐘顯色。測(cè)OD，以O(shè)D為縱坐標(biāo)，銨根離子為橫坐標(biāo)。然后做出標(biāo)準(zhǔn)曲線。 酶活測(cè)定：取1ml發(fā)酵液，緩沖液洗兩次之后，再加500uL的緩沖液重懸，因底物能夠進(jìn)入細(xì)胞，所以可以直接測(cè)定，取10uL重懸液稀釋到50uL，再加200uL過(guò)量的底物。先在37℃反應(yīng)20min，再加顯色劑I和II各500uL。再在37℃放置20分鐘顯色。測(cè)OD，然后換算酶活。 問(wèn)題是：1.這樣測(cè)出來(lái)的標(biāo)準(zhǔn)曲線的銨根離子的單位是umol/mL還是umol 2.換算成1ml發(fā)酵液的酶活的話該怎么換算，也就是多少U/mL，小弟最近被這個(gè)問(wèn)題搞暈了，一直困惑，希望能有人指點(diǎn)指點(diǎn)，小弟不勝感激�。�！ |
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zhou325912
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