 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2735 | 回復(fù): 15 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
xiangchou812木蟲 (小有名氣)
|
[求助]
求助土壤總DNA提取和16S rDNA擴(kuò)增 已有5人參與
|
|
|
最近在做土壤微生物多樣性研究，結(jié)果在總DNA提取和pcr擴(kuò)增上遇到難題。先是買國(guó)內(nèi)生物公司的土壤DNA提取試劑盒，使用固氮菌通用引物PolF和PolR為引物，TAKARA的rTaq酶擴(kuò)增，結(jié)果為陰性，懷疑國(guó)內(nèi)試劑盒不行，遂換用進(jìn)口MoBio公司強(qiáng)力土壤DNA提取試劑盒，瓊脂糖檢測(cè)條帶挺亮，0D260/280也正常，260/230只有1.2左右，但PCR結(jié)果還是陰性，后又合成細(xì)菌通用引物27F/2492R，直接以DH5a菌液為模板，可以擴(kuò)出預(yù)期大小條帶，但以提取到的土壤DNA為模板，又是陰性。有文獻(xiàn)說Mg2+濃度被土壤腐殖質(zhì)等螯合會(huì)抑制PCR，故在反應(yīng)體系中加入土壤DNA和DH5a菌液混合物為模板，卻可擴(kuò)到明亮做條帶。懷疑土壤保存方法有問題，又從院子草地里取新鮮土樣，提DNA，PCR結(jié)果仍是陰性。來回折騰快一個(gè)月了，總是原地踏步，實(shí)是無語，特求教大神們，問題會(huì)在哪里？感激涕零！ [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
292求調(diào)劑
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
304求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
材料與化工考研調(diào)劑
已經(jīng)有17人回復(fù)
-
321求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
329求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
材料求調(diào)劑一志愿哈工大324
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
286求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
083000學(xué)碩274求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
311求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
一志愿C9材料與化工專業(yè)總分300求調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 對(duì)細(xì)菌進(jìn)行測(cè)序時(shí)，測(cè)的是16S rDNA還是16S rRNA
已經(jīng)有25人回復(fù)
- 細(xì)菌基因組中為什么會(huì)有多個(gè)16srDNA片段？
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 水洗下來的土壤100度烘干一夜后，提取的總DNA沒有結(jié)果，是什么原因？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- DGGE中，提取土壤DNA后做V3擴(kuò)增，出現(xiàn)兩條帶
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 絕對(duì)定量熒光PCR中做標(biāo)準(zhǔn)曲線的DNA的獲得。
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 各種提取土壤DNA的試劑盒，那個(gè)更好
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 16S rDNA 鑒定細(xì)菌的方法及其注意事項(xiàng)
已經(jīng)有236人回復(fù)
- 16S rRNA序列分析法和16rDNA分析的區(qū)別？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 求教 放線菌 16S rDNA 比對(duì)
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 細(xì)菌16S的問題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 土壤微生物DNA提取不出來，是什么原因？
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 16S rDNA測(cè)序問題
已經(jīng)有21人回復(fù)
- 土壤微生物16s rDNA 18s rDNA 抑制擴(kuò)增不出來？？？？？？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 魚腸道微生物DNA的提取方法
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 試劑盒提取細(xì)菌DNA后，跑膠檢測(cè)有條帶，但是PCR后卻無擴(kuò)增產(chǎn)物。
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 土壤總細(xì)菌16S PCR-條帶不亮的問題
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 16S rRNA文庫 引物的選擇
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 通用引物擴(kuò)增細(xì)菌16S rDNA
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 16S rRNA 和16S rDNA的區(qū)別
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 16S rDNA測(cè)序問題
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 16s rDNA 擴(kuò)增引物的選擇
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 16s r DNA擴(kuò)增出來的片段都是1Kb左右，是不是有問題啊？求助
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 16S PCR擴(kuò)增的問題
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】細(xì)菌鑒定
已經(jīng)有14人回復(fù)
wubingqi
木蟲 (小有名氣)
- MicEPI: 1
- 應(yīng)助: 79 (初中生)
- 金幣: 5264.9
- 散金: 10
- 紅花: 15
- 帖子: 242
- 在線: 514.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 1049797
- 注冊(cè): 2010-06-30
- 性別: GG
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
4樓2014-04-24 10:04:27
lx李欣
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 3.1
- 散金: 5
- 帖子: 10
- 在線: 14.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 3138339
- 注冊(cè): 2014-04-15
- 性別: MM
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
2樓2014-04-24 08:31:44
20093651
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- MicEPI: 2
- 應(yīng)助: 212 (大學(xué)生)
- 金幣: 5307.4
- 散金: 3276
- 紅花: 63
- 沙發(fā): 2
- 帖子: 3731
- 在線: 656.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 1176129
- 注冊(cè): 2010-12-23
- 專業(yè): 金屬材料表面科學(xué)與工程
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
dllchina: 金幣+3, good~ 2014-04-24 21:35:47
xiangchou812: 金幣+2, ★★★很有幫助 2014-04-26 11:20:55
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
dllchina: 金幣+3, good~ 2014-04-24 21:35:47
xiangchou812: 金幣+2, ★★★很有幫助 2014-04-26 11:20:55
| 首先糾正一下，細(xì)菌通用引物是27F/1492R而非2492，我不知道你怎么擴(kuò)的，DNA條帶檢測(cè)都有，怎么就擴(kuò)不出來？一般簡(jiǎn)單的方法是把DNA樣品稀釋基本都可以解決，或者你直接把DNA純化之后再來做，不知道你的是什么土樣，如果腐殖質(zhì)含量太高，土樣應(yīng)該先用磷酸緩沖液洗一下再提DNA，就說這么多吧，樓主自己看著辦，祝好 |
3樓2014-04-24 09:29:21
cx13033236
木蟲 (小有名氣)
- MicEPI: 2
- 應(yīng)助: 42 (小學(xué)生)
- 金幣: 1876.9
- 紅花: 3
- 帖子: 217
- 在線: 161.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 1543794
- 注冊(cè): 2011-12-19
- 性別: GG
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
5樓2014-04-24 10:21:40
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +10 | PolarBear11 2026-03-26 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 315分求調(diào)劑 +7 | 26考研上岸版26 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈爾濱工業(yè)大學(xué)材料與化工方向336分 +6 | 辰沐5211314 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 【求調(diào)劑】085601材料工程專碩 | 總分272 | +5 | 腳滑的守法公民 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +8 | 小木蟲085600 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)求調(diào)劑 +4 | 起個(gè)名咋這么難 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿北化085600材料專碩275|有文章專利｜求調(diào)劑 +3 | Micky11223 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 276求調(diào)劑。有半年電池和半年高分子實(shí)習(xí)經(jīng)歷 +10 | 材料學(xué)257求調(diào)劑 2026-03-23 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑，一志愿 南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩 +4 | @taotao 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +4 | 崔wj 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 341求調(diào)劑 +7 | 青檸檬1 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +6 | wfh030413@ 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境專碩324分求調(diào)劑推薦 +5 | 軒小寧—— 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +6 | 藍(lán)山月 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料與化工328分調(diào)劑 +6 | 。，。，。，。i 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 26考研-291分-廈門大學(xué)（085601）-柔性電子學(xué)院材料工程專業(yè)求調(diào)劑 +3 | min3 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +7 | 加一一九 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | 研研，接電話 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)調(diào)劑 +5 | Surekei 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +5 | Zhangbod 2026-03-21 | 7/350 |
|