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hepg2 細(xì)胞復(fù)蘇 已有8人參與
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我一個(gè)月前凍存的細(xì)胞，復(fù)蘇兩次了，都以失敗告終啊。復(fù)蘇時(shí)細(xì)胞量挺多的，但過(guò)夜后貼壁的細(xì)胞極少，換液后就剩一點(diǎn)兒了。如下圖： 繼續(xù)培養(yǎng)幾天就這樣了：  知道怎么回事嘛？我的凍存步驟是：收集細(xì)胞，加入1ml凍存液（10%DMSO）。4度10min，20度30min，-80度過(guò)夜，然后保存在液氮中。 復(fù)蘇步驟是：從液氮中取出一管細(xì)胞后立即放入37度水浴中解凍，快速解凍后，再加入新鮮培養(yǎng)基過(guò)夜培養(yǎng)，換液。 能看出我的問(wèn)題在哪嘛？ |
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wys476488620
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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不太清楚樓主的細(xì)胞怎么回事 先說(shuō)說(shuō)我的吧 凍存 10%DMSO 40%血清 50%培養(yǎng)液 十的六次方細(xì)胞 4度1H -20度 1H -80度1H 液氮 復(fù)蘇 37度 速溶 然后加到50毫升離心管（加20毫升無(wú)血清培養(yǎng)基 ） 1000rpm 10min 4℃ 棄上清 10%血清培養(yǎng)液 重懸 加合適的培養(yǎng)液在合適的培養(yǎng)瓶培養(yǎng) 希望和樓主共同進(jìn)步 養(yǎng)細(xì)胞確實(shí)是 一門(mén)技術(shù)活 用我老師的話(huà)說(shuō)比養(yǎng)孩子都難 |
9樓2014-04-25 22:58:09
kueradi
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2樓2014-04-25 14:52:20
yu756849034
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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不知道你的細(xì)胞懸液的量是多少？ 你的細(xì)胞在4℃放置的時(shí)間有點(diǎn)少，不過(guò)你的復(fù)蘇應(yīng)該是沒(méi)有問(wèn)題的。我們實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞凍存步驟是每一盤(pán)細(xì)胞用2ml10%的細(xì)胞凍存液制細(xì)胞懸液，然后分裝到兩個(gè)細(xì)胞凍存管中，20℃30min，4℃1h，-20℃2h，-80℃過(guò)夜，在轉(zhuǎn)移至液氮之中。每次都能夠復(fù)蘇成功，試了好多次是沒(méi)有問(wèn)題的。 不過(guò)現(xiàn)在我們實(shí)驗(yàn)室買(mǎi)了梯度凍存盒，細(xì)胞凍存管密封完之后直接放到梯度凍存盒中放入-80℃過(guò)夜，在轉(zhuǎn)移至液氮之中就行了。  |
3樓2014-04-25 16:14:44
4樓2014-04-25 16:57:22
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