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關(guān)于大腸桿菌涂板（含氨芐）培養(yǎng)的問題 已有5人參與
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我用新配的培養(yǎng)基和天根的氨芐（100mg/ml）涂板培養(yǎng)大腸桿菌，做了對(duì)照試驗(yàn)，共5個(gè)板，2個(gè)不加氨芐，3個(gè)加氨芐，不加氨芐的一個(gè)直接涂的DH5α感受態(tài)細(xì)胞，一個(gè)涂的是以前長出過并且連接轉(zhuǎn)化成功的菌；加氨芐的三個(gè)板一個(gè)還是直接涂感受態(tài)細(xì)胞（1號(hào)），一個(gè)是以前成功的菌（2號(hào)），還有一個(gè)是新轉(zhuǎn)化的菌（3號(hào)）。培養(yǎng)16小時(shí)，結(jié)果沒加氨芐的板都長了大片的菌，這說明培養(yǎng)基是正常的，而加了氨芐的板1號(hào)沒有，2號(hào)有大片的菌，跟沒涂氨芐的密度差不多，3號(hào)有零星的菌（4、5個(gè)吧），每個(gè)菌周圍有那種小的衛(wèi)星菌落。以前成功的菌和新轉(zhuǎn)化的菌都是之前涂板剩下的菌在涂板前活化了45min，感受態(tài)細(xì)胞是加了800ul培養(yǎng)基后活化45min。這個(gè)結(jié)果是不是說明氨芐有問題呢，還是我在做培養(yǎng)基的時(shí)候氨芐沒有加均勻，可是我加氨芐的時(shí)候培養(yǎng)基溫度還算合適，而且也混勻了。 請(qǐng)教各位出現(xiàn)這個(gè)現(xiàn)象是什么原因，我上周的時(shí)候用實(shí)驗(yàn)室自己配的氨芐的時(shí)候12小時(shí)就長得很好了。這個(gè)12小時(shí)的時(shí)候菌落還比較小，時(shí)間長了就有衛(wèi)星菌落。但是這個(gè)氨芐之前實(shí)驗(yàn)室其他人用過說是還算正常，但也需要培養(yǎng)較長時(shí)間。 |
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我是蛋殼兒20樓2014-05-07 03:21:59
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氨芐應(yīng)該沒問題，轉(zhuǎn)化后活化時(shí)間也沒問題，我有時(shí)候活化2～3個(gè)小時(shí)。 氨芐抗性的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸，平板培養(yǎng)時(shí)間長了容易形成衛(wèi)星菌落（建議不超過16～17小時(shí)），你可以涂板前在菌液里再加20uL氨芐（默認(rèn)9cm平板，20mL平板），混勻后涂板。 不建議挑取有衛(wèi)星菌的單菌落。 DH5α應(yīng)該長較快，應(yīng)該12個(gè)小時(shí)就可以挑單菌落了。 |
9樓2014-04-29 04:19:34
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| 從你的描述中看，板子應(yīng)該沒有問題，而且感受態(tài)沒有污染，之前轉(zhuǎn)化的菌涂板子，應(yīng)該長大片的菌，沒有問題，只是你轉(zhuǎn)化的效率可能太低，衛(wèi)星菌落一般都沒有什么東西，如果就4-5個(gè)菌落，建議把中心的菌落挑過夜培養(yǎng)，然后提取質(zhì)粒檢驗(yàn)。 |
10樓2014-04-29 08:03:42
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