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關(guān)于大腸桿菌涂板（含氨芐）培養(yǎng)的問題 已有5人參與
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我用新配的培養(yǎng)基和天根的氨芐（100mg/ml）涂板培養(yǎng)大腸桿菌，做了對照試驗，共5個板，2個不加氨芐，3個加氨芐，不加氨芐的一個直接涂的DH5α感受態(tài)細胞，一個涂的是以前長出過并且連接轉(zhuǎn)化成功的菌；加氨芐的三個板一個還是直接涂感受態(tài)細胞（1號），一個是以前成功的菌（2號），還有一個是新轉(zhuǎn)化的菌（3號）。培養(yǎng)16小時，結(jié)果沒加氨芐的板都長了大片的菌，這說明培養(yǎng)基是正常的，而加了氨芐的板1號沒有，2號有大片的菌，跟沒涂氨芐的密度差不多，3號有零星的菌（4、5個吧），每個菌周圍有那種小的衛(wèi)星菌落。以前成功的菌和新轉(zhuǎn)化的菌都是之前涂板剩下的菌在涂板前活化了45min，感受態(tài)細胞是加了800ul培養(yǎng)基后活化45min。這個結(jié)果是不是說明氨芐有問題呢，還是我在做培養(yǎng)基的時候氨芐沒有加均勻，可是我加氨芐的時候培養(yǎng)基溫度還算合適，而且也混勻了。 請教各位出現(xiàn)這個現(xiàn)象是什么原因，我上周的時候用實驗室自己配的氨芐的時候12小時就長得很好了。這個12小時的時候菌落還比較小，時間長了就有衛(wèi)星菌落。但是這個氨芐之前實驗室其他人用過說是還算正常，但也需要培養(yǎng)較長時間。 |
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jukongka
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氨芐應(yīng)該沒問題，轉(zhuǎn)化后活化時間也沒問題，我有時候活化2～3個小時。 氨芐抗性的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸，平板培養(yǎng)時間長了容易形成衛(wèi)星菌落（建議不超過16～17小時），你可以涂板前在菌液里再加20uL氨芐（默認9cm平板，20mL平板），混勻后涂板。 不建議挑取有衛(wèi)星菌的單菌落。 DH5α應(yīng)該長較快，應(yīng)該12個小時就可以挑單菌落了。 |
9樓2014-04-29 04:19:34
zep616745243
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