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我his柱純化了一個(gè)蛋白，然后過凝膠柱，只有一個(gè)峰，將蛋白進(jìn)行SDS-PAGE時(shí)候，有單一的目的帶 而進(jìn)行native-PAGE的時(shí)候，卻有兩條帶，一條粗的帶，應(yīng)該是我的目的帶，上面還有一條細(xì)帶 如果那條細(xì)帶是多聚體的形式存在，那么為什么過凝膠柱的時(shí)候卻只有一個(gè)峰？ 那個(gè)多聚體可能是在加入native-PAGE 的loading的時(shí)候，形成的多聚體嗎？ |
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7樓2014-05-04 21:59:20
liuderong
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+5, 鼓勵(lì)交流！ 2014-05-04 02:06:33
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1.過親和柱的時(shí)候，如果幾個(gè)峰重疊在一起，那顯示出來就是一個(gè)峰了。從同一個(gè)峰中收集的蛋白，跑電泳時(shí)有幾條帶很常見的。 2.聚體的形成可能在你上柱之前，只是洗脫的時(shí)候聚體峰和單體峰重疊了，所以看不出來。Ni柱親和是根據(jù)His標(biāo)簽和Ni柱親和力來分離的，而不是根據(jù)分子量大小來分的。 3.也有可能是蛋白純化之后再形成聚體，未純化的時(shí)候雜蛋白比較多，對(duì)聚體形成有影響，純化后聚體形成比較容易。 |
2樓2014-05-03 22:54:11
3樓2014-05-04 11:04:46
liuderong
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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4樓2014-05-04 11:14:47
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