 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3430 | 回復(fù): 7 | ||
[求助]
pPIC9表達(dá)質(zhì)粒XhoI/EcoRI雙酶切 已有2人參與
|
| 請問一下，我現(xiàn)在做pPIC9表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建，連上200bp目的片段，并做了PCR和測序鑒定，都是正確的。但現(xiàn)在用XhoI和EcoRI雙酶切，除了切出pPIC9、200bp的目的條帶外，在1000-2000bp處還有一條弱弱的條帶，不知道是怎么回事，我已經(jīng)檢查了質(zhì)粒里都分別只有一個XhoI和EcoRI的酶切位點(diǎn)，那這個表達(dá)質(zhì)粒算是構(gòu)建成功了嗎，直接線性化做表達(dá)的話會有什么影響嗎？請各位高手指點(diǎn)。謝謝！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有203人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 質(zhì)粒pPICZA用XhoI與NotI酶切，酶切5h后條帶變成250bp左右
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 請問表達(dá)載體pPIC9K里有幾個XhoI的酶切位點(diǎn)？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- pET28a雙酶切后連接目的基因，什么也不長。。。
已經(jīng)有23人回復(fù)
- 關(guān)于EcoRI的部分酶切
已經(jīng)有15人回復(fù)
2樓2014-05-19 16:20:10
luwei13566
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 3
- 應(yīng)助: 184 (高中生)
- 金幣: 4351.4
- 散金: 97
- 紅花: 35
- 帖子: 641
- 在線: 261.1小時
- 蟲號: 2380655
- 注冊: 2013-03-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
3樓2014-05-19 20:19:27
4樓2014-05-20 16:49:25
luwei13566
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 3
- 應(yīng)助: 184 (高中生)
- 金幣: 4351.4
- 散金: 97
- 紅花: 35
- 帖子: 641
- 在線: 261.1小時
- 蟲號: 2380655
- 注冊: 2013-03-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
5樓2014-05-20 19:37:55
6樓2014-05-21 10:18:20
luwei13566
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 3
- 應(yīng)助: 184 (高中生)
- 金幣: 4351.4
- 散金: 97
- 紅花: 35
- 帖子: 641
- 在線: 261.1小時
- 蟲號: 2380655
- 注冊: 2013-03-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
|
pPIC9K的BamHI位點(diǎn)在α-signal sequence前面，整個質(zhì)粒上還有幾個和酶識別位點(diǎn)差一個堿基的位點(diǎn)，如果酶切條件不合適都可能切出來，如果酶切不完全質(zhì)粒的超螺旋沒去除干凈也會出現(xiàn)條帶，只要你用通用引物測序正確就說明你的基因連在了正確的位置上，你雙酶切回收的片段也是正確的，如果回收的片段不對的話首先你很難連上，就算連上大小也不對，測序不是多克隆位點(diǎn)里沒東西就是擴(kuò)增不出來?xiàng)l帶�，F(xiàn)在的結(jié)果不影響你后期的線性化。 還有LZ你把9K的信號肽切掉了難道是想胞內(nèi)表達(dá)？ |
7樓2014-05-21 14:36:14
8樓2014-05-21 16:37:36
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 sweet561 的主題更新
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿西安交通大學(xué)材料工程專業(yè) 282分求調(diào)劑 +3 | 楓橋ZL 2026-03-18 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑，求各位老師收留 +10 | 秋有木北 2026-03-14 | 10/500 |
|
|
|
[考研]
 271材料工程求調(diào)劑
+5
|
.6lL 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 344求調(diào)劑 +6 | knight344 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)工程321分求調(diào)劑 +15 | 大米飯！ 2026-03-15 | 18/900 |
|
|
|
[考研] 材料與化工一志愿南昌大學(xué)327求調(diào)劑推薦 +8 | Ncdx123456 2026-03-13 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0854可跨調(diào)劑，一作一項(xiàng)核心論文五項(xiàng)專利，省、國級證書40+數(shù)一英一287 +8 | 小李0854 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4 | pupcoco 2026-03-17 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +4 | 睿08 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 工科材料085601 279求調(diào)劑 +6 | 困于星晨 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 334求調(diào)劑 +3 | 志存高遠(yuǎn)意在機(jī)?/a> 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工求調(diào)劑 +5 | 緒幸與子 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿蘇州大學(xué)材料工程（085601）專碩有科研經(jīng)歷三項(xiàng)國獎兩個實(shí)用型專利一項(xiàng)省級立項(xiàng) +6 | 大火山小火山 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京大學(xué)，080500材料科學(xué)與工程，調(diào)劑 +4 | Jy? 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 327求調(diào)劑 +6 | 拾光任染 2026-03-15 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 085601材料工程315分求調(diào)劑 +3 | yang_0104 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +4 | 威化餅07 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑 +4 | z1z2z3879 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +9 | Koxui 2026-03-12 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑（食品/專碩） +3 | xc321 2026-03-12 | 6/300 |
|