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藍(lán)默兒金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
ELISA空白值過(guò)高 已有2人參與
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| 進(jìn)行的是夾心ELISA，用多抗做包被抗體，抗原為原核表達(dá)的蛋白，之后加酶標(biāo)單抗�？瞻讓�(duì)照孔是不加抗原，加的是PBS，其它相同。 |
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碧柯
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5樓2016-12-23 13:41:46
antibodyknow
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
藍(lán)默兒: 金幣+3, ★有幫助 2014-05-23 09:43:10
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
藍(lán)默兒: 金幣+3, ★有幫助 2014-05-23 09:43:10
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兩種可能： 1.你的包被用的多抗與酶標(biāo)單抗之間有交叉反應(yīng)。檢查一下你的多抗是哪種多抗：鼠多抗，兔多抗還是羊多抗？你的酶標(biāo)單抗與多抗最好是同一種來(lái)源。多抗做包被抗體本身就不是一個(gè)好選擇，容易出現(xiàn)交叉反應(yīng)，導(dǎo)致背景高。 2.你的整個(gè)ELISA過(guò)程是否封閉、洗滌充分。建議在所用的封閉和洗滌buffer中加Tween20至0.1%，減少非特異性結(jié)合。 3.建議做一個(gè)完全空白對(duì)照，即包被時(shí)用PBS，封閉環(huán)節(jié)正常，樣品用PBS，然后正常加酶標(biāo)二抗。可以初步判斷你的ELISA系統(tǒng)是否正常，進(jìn)而可以判斷出你的多抗和二抗間是否有交叉反應(yīng)。 祝好運(yùn)！ |
2樓2014-05-22 22:37:00
藍(lán)默兒
金蟲(chóng) (小有名氣)
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3樓2014-05-23 09:44:53
159236478
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4樓2014-05-23 19:39:33
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