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chengyun5捐助貴賓 (小有名氣)
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[求助]
PCR 目的條帶出不來(lái)
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我的目的片段是3000bp 左右 PCR體系是25ul 上下游引物各0.5ul 模板 0.5ul 雙蒸水11ul Prime star 12.5ul PCR條件 98℃ 5min 預(yù)變性 98℃ 10s 50℃ 5s 72℃ 1min 72℃ 10min 終延伸 電泳后條帶如圖，我試著改變了退火溫度 55℃ 60℃ 可是都不對(duì) dd.jpg |
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elise1987
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【答案】應(yīng)助回帖
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確定模版沒(méi)問(wèn)題，引物沒(méi)合錯(cuò)？建議樓主搞個(gè)陽(yáng)性對(duì)照在旁邊排除一下，然后對(duì)pcr條件進(jìn)行優(yōu)化，如樓上所說(shuō)降落傘PCR可以一試，極大限度排除非特異性擴(kuò)增。另外也可以用梯度PCR儀篩選一下退火溫度。還有，模版濃度過(guò)高也可能導(dǎo)致P不出來(lái)。個(gè)人感覺(jué)這是個(gè)很簡(jiǎn)單的反應(yīng)。。。只要東西沒(méi)用錯(cuò)。 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
3樓2014-07-07 22:15:34
飛約瘋?cè)嗽?/a>
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科學(xué)怪人
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2樓2014-05-27 11:05:33
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