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植物微生物總DNA 的提取方法 已有2人參與
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| 有沒有人提過植物微生物的總DNA �。抗蚯缶唧w操作步驟啊.順便問下植物總DNA 和微生物總DNA 是一樣的嗎？ |
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Neo2000
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2樓2014-05-23 17:30:19
3樓2014-05-24 17:03:49
Neo2000
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4樓2014-05-24 17:09:29
【答案】應助回帖
★ ★
感謝參與，應助指數 +1
kx444555: 金幣+2, 鼓勵交流 2014-05-24 22:39:28
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1) 挑取單菌落至5mL液體培養(yǎng)基中于37℃，180r/min搖床上過夜培養(yǎng)，分裝于2mL的EP管中； 2) 將EP管12000r/min離心15s收集菌體，STE（什么試劑？）洗滌2次，再次離心，菌體重懸于1mLTE溶液中； 3) 加入100mg/mL溶菌酶溶液5ul( 終濃度為100ug/ml)，37℃保溫20min； 4) 再加入100 ul蛋白酶K，56℃，1h； 5) 再加入RNase（10mg/ml）2.5ul，至終濃度25 ug/ml，然后加入10%SDS溶液70ul，EDTA溶液50 ul ，37℃保溫30min； 6) 加入蛋白酶K(20mg/ml)2ul，終濃度為50ul/ml，37℃保溫60~90min； 7) 加入等體積的酚，混勻，12000r/min離心5min，取上清于另一離心管中； 8) 上清液中加入等體積的酚：氯仿，混勻，12000r/min離心5min，取上清于另一個離心管中； 9) 加入2倍體積無水乙醇沉淀，-20℃靜置30min后，12000r/min離心5min； 10) 70%乙醇洗滌1次，室溫下晾干，加30 ulTE溶解，于-20℃保存?zhèn)溆茫?br /> 這個方法我用過很多次，每次都成功，祝你好運！ 還有，如果想省事的話可以試試水煮法。但對于細胞壁較厚的G+菌，這種方法就不管用了 |
5樓2014-05-24 21:55:07
6樓2014-05-26 08:23:00
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