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[求助]
植物微生物總DNA 的提取方法 已有2人參與
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| 有沒(méi)有人提過(guò)植物微生物的總DNA �。抗蚯缶唧w操作步驟啊.順便問(wèn)下植物總DNA 和微生物總DNA 是一樣的嗎？ |
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3樓2014-05-24 17:03:49
Neo2000
木蟲(chóng) (著名寫手)
- 應(yīng)助: 639 (博士)
- 金幣: 8720.2
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- 在線: 269.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 322365
- 注冊(cè): 2007-03-11
- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
2樓2014-05-23 17:30:19
Neo2000
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4樓2014-05-24 17:09:29
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2014-05-24 22:39:28
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kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2014-05-24 22:39:28
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1) 挑取單菌落至5mL液體培養(yǎng)基中于37℃，180r/min搖床上過(guò)夜培養(yǎng)，分裝于2mL的EP管中； 2) 將EP管12000r/min離心15s收集菌體，STE（什么試劑？）洗滌2次，再次離心，菌體重懸于1mLTE溶液中； 3) 加入100mg/mL溶菌酶溶液5ul( 終濃度為100ug/ml)，37℃保溫20min； 4) 再加入100 ul蛋白酶K，56℃，1h； 5) 再加入RNase（10mg/ml）2.5ul，至終濃度25 ug/ml，然后加入10%SDS溶液70ul，EDTA溶液50 ul ，37℃保溫30min； 6) 加入蛋白酶K(20mg/ml)2ul，終濃度為50ul/ml，37℃保溫60~90min； 7) 加入等體積的酚，混勻，12000r/min離心5min，取上清于另一離心管中； 8) 上清液中加入等體積的酚：氯仿，混勻，12000r/min離心5min，取上清于另一個(gè)離心管中； 9) 加入2倍體積無(wú)水乙醇沉淀，-20℃靜置30min后，12000r/min離心5min； 10) 70%乙醇洗滌1次，室溫下晾干，加30 ulTE溶解，于-20℃保存?zhèn)溆茫?br /> 這個(gè)方法我用過(guò)很多次，每次都成功，祝你好運(yùn)！ 還有，如果想省事的話可以試試水煮法。但對(duì)于細(xì)胞壁較厚的G+菌，這種方法就不管用了 |
5樓2014-05-24 21:55:07
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