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sonhey金蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于去磷酸酶加入時(shí)間 已有2人參與
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| 請問去磷酸酶的加入實(shí)在酶切時(shí)間加入還是酶切完成以后再加入，我做的是酶切時(shí)間加入的，但是自連效率還是挺高的。剛才我看了一下還有一個(gè)去磷酸化酶的buffer，所以我有的糾結(jié)，不知道什么時(shí)間加入。希望蟲友幫助，小弟是初入實(shí)驗(yàn)室，還請幫助，謝謝!!! |
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Neo2000
木蟲 (著名寫手)
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2樓2014-05-25 19:12:14
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-25 20:14:01
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myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-25 20:14:01
| 這種問題充分取決于你用的哪個(gè)公司的酶，一般而言，大多數(shù)公司都會(huì)給出一個(gè)分子生物學(xué)常用酶在這些常用酶buffer里面的活性，也就是buffer通用性。以fermentas的FastAP為例，這個(gè)酶幾乎在所有的常用酶buffer里面均有100%活性，所以根本沒有必要在酶切之后還要去純化再加，直接加進(jìn)去就可以了。當(dāng)然，考慮到酶一般含有50%的甘油，在一些對甘油濃度敏感的內(nèi)切酶中，還需要考慮加入對甘油濃度的影響，這種情況下一般放大一點(diǎn)點(diǎn)體積就可以解決了。 |
3樓2014-05-25 19:15:17
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