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陶盛昌木蟲 (正式寫手)
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[求助]
DEAE纖維柱斷層求助 已有2人參與
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| 求助，各位蟲友，我的柱子裝好后，加恒流泵后經(jīng)常斷層，不知何因？填料是DEAE-52，柱子是中壓層析柱，200g的填料溶于400ml的水，填料上柱前，放入抽濾瓶里真空脫過(guò)起泡，上柱沉降后沒(méi)什么問(wèn)題，但恒流泵平衡后，會(huì)出現(xiàn)斷層的現(xiàn)象，各位知道為什么嗎，給些建議，求教 |
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你可以試試，不過(guò)我不知道你是從什么里面提取出的多糖，還有你上柱子前多糖處理過(guò)沒(méi)有，如果你的粗多糖只是水提醇沉得到話，應(yīng)該進(jìn)行脫色、脫蛋白處理，否則會(huì)影響到你得分離效果。至于你上樣量的問(wèn)題，你問(wèn)廠家也是白問(wèn)，不同糖上樣量不一樣的。DEAE-52是陰離子交換柱，用來(lái)分離中性多糖和酸性多糖。上樣后一般都是階段性梯度洗脫，洗脫液一般是水、0.1、0.3、0.5、0.7mol/L的NaCl，其中水洗下來(lái)的為中性多糖。你的上樣量根據(jù)我的經(jīng)驗(yàn)和你的填料量上1g應(yīng)該不是問(wèn)題，但我不了解你得多糖只能這樣推測(cè)。想確定上樣量是否過(guò)載：1.先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，少量上樣（可以是幾百毫克，建議不要太多，這一步最好不要過(guò)載），看你的多糖各個(gè)洗脫階段的洗脫情況。2.假如你的多糖是酸性多糖和中性多糖的混合多糖，你就可以做出洗脫曲線。3.這一步你可以增加上樣量，可以增加一倍或者按照三分之二增加（假如原來(lái)上樣600mg，這次你可以上樣1g），然后繪制洗脫曲線，假如剛開始洗脫不久就有多糖出來(lái)同時(shí)者其他洗脫組分峰（中性多糖組分和酸性多糖組分）未明顯增加說(shuō)明你過(guò)載了，反之你可以繼續(xù)增加上樣量。4.假如只有酸性多糖，原理與上面的方法一樣的。如果你前期脫色脫蛋白了，可以先試試 |
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陶盛昌11樓2014-06-03 14:18:03
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| DEAE-52屬于陰離子交換柱，一般上柱前先得預(yù)處理，一般是保存在一定濃度的乙醇中，先得用水充分溶脹（過(guò)夜）并除去其中的乙醇和不溶物，建議過(guò)夜后用水多洗幾次。然后用堿-酸-堿處理，并用蒸餾水洗至中性即可上柱。不知道樓主這些做沒(méi)做，如果做了，還斷層請(qǐng)問(wèn)你得柱子什么規(guī)格，纖維素柱一般用短粗的，平衡流速一般1ml/min，這個(gè)平衡時(shí)的流速一定要大于你得上樣后的洗脫流速，不然可能會(huì)斷層或者降低柱效，造成你試驗(yàn)的重現(xiàn)性差，請(qǐng)樓主參考 |
2樓2014-05-26 11:05:19
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6樓2014-05-28 13:18:29
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【答案】應(yīng)助回帖
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你這個(gè)我個(gè)人認(rèn)為有幾種可能，一種就是你裝柱子時(shí)填料一定要混勻，用玻璃棒引流裝柱.還有就是你平衡的時(shí)間不夠，平衡柱子時(shí)一定要平衡到你的柱高不再下降，否則影響柱效和重現(xiàn)性，你可以增加平衡時(shí)間，觀察柱高。還有就是想問(wèn)下你上樣后的洗脫樣品的流速是多少，如果也是1ml/min，那你平衡柱子時(shí)的流速要比它大。還有就是你的填料是國(guó)產(chǎn)的還是進(jìn)口的，國(guó)產(chǎn)的有時(shí)均一性不好也會(huì)出現(xiàn)這種情況，只要保證柱高不變分離效果和重現(xiàn)性也沒(méi)問(wèn)題的，前期是你排除掉裝柱時(shí)的其它問(wèn)題的可能性。 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
7樓2014-06-01 06:36:43
陶盛昌
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3樓2014-05-26 11:55:01
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4樓2014-05-26 13:13:01
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5樓2014-05-26 14:47:39
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謝謝神雕哥，我的平衡時(shí)間有18個(gè)小時(shí)，我洗脫樣品的流速確實(shí)是1ml/min，平衡的流速也是1ml/min，不知道到時(shí)候會(huì)不會(huì)有什么問(wèn)題？我的填料是國(guó)產(chǎn)的，上海源葉生物的，有可能是國(guó)產(chǎn)的均一性不好，柱高的話已經(jīng)平衡好了，我平衡了18個(gè)小時(shí)，柱高沒(méi)什么變化了。我裝了幾次柱子，都會(huì)出現(xiàn)皺紋，我想會(huì)不會(huì)就是這樣的，只要不斷層，沒(méi)有大氣泡，柱高穩(wěn)定，應(yīng)該不會(huì)有什么問(wèn)題，所以我準(zhǔn)備先上樣洗脫觀察結(jié)果怎么樣，如果一切正常，那么柱子有些小皺紋就應(yīng)該是沒(méi)有什么大影響的。還有順便問(wèn)問(wèn)，我的柱子是3.5*50cm的中壓柱，裝的是200g的DEAE-52，如果上樣的話，上樣的量應(yīng)該是多少？我查了很多文獻(xiàn)，大多只上幾百毫克，我想問(wèn)這個(gè)有沒(méi)有什么規(guī)律，多少量的DEAE-52可以上多少量的樣品？我有10g的粗多糖，要是每次只上幾百毫克，那要上好多次，很有點(diǎn)繁瑣。請(qǐng)神雕哥指點(diǎn)，謝謝 |
8樓2014-06-02 19:35:45
陶盛昌
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10樓2014-06-03 09:10:53
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