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xujingyuanxu銅蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
DNA聚丙烯酰胺凝膠電泳后銀染不顯示帶 已有3人參與
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| 最近再做分子標(biāo)記，由于水平膠跑不出條帶，就改用垂直膠來(lái)跑。用銀染法顯色。之前做過(guò)幾次染色還算成功，之后再做就效果不好，根據(jù)文獻(xiàn)改動(dòng)了顯影方法，可是最近幾天跑膠染色的結(jié)果是全部白板，連Marker都染不出來(lái)。之前的方法：乙醇固定，漂洗，硝酸浸泡，漂洗，硝酸銀染色，漂洗，加甲醛的碳酸鈉顯影；現(xiàn)在把硝酸浸泡這一步省去了，加甲醛的碳酸鈉顯影，硝酸銀染色時(shí)間從20mins加至30分鐘，漂洗變?yōu)橐淮�，但是最近連Marker也無(wú)法染出來(lái)。有時(shí)候只有一塊板有顯影，其它幾塊都不顯，不知道哪里出了問(wèn)題，求指導(dǎo)。如果是PCR的問(wèn)題，為什么Marker也染不出；如果是染色的問(wèn)題，為什么有時(shí)候能部分染色？還有就是硝酸浸泡是什么作用！萬(wàn)分感謝！ |
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xujingyuanxu
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4樓2014-05-27 20:21:59
飛約瘋?cè)嗽?/a>
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-05-27 18:51:27
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分子標(biāo)記不用垂直膠吧，水平膠如果不出來(lái)，問(wèn)題就可能涉及以下幾個(gè)方面： 1 DNA降解厲害 2 分子標(biāo)記的引物出現(xiàn)問(wèn)題 3 分子標(biāo)記PCR體系不對(duì) 4 分子標(biāo)記時(shí)PCR退火溫度過(guò)高或過(guò)低 建議：做一個(gè)touchdown PCR ， 感覺(jué)不是PAGE試驗(yàn)的問(wèn)題 謝謝！ |
2樓2014-05-27 16:45:29
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5樓2014-05-27 20:28:32
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6樓2014-05-28 15:33:31
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