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demonsboy金蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助酶聯(lián)免疫的問題 已有5人參與
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| 本人在做一種雙抗體夾心法試劑盒，評估一對抗體時，采用抗體直接包板捕捉抗原顯示，兩種配對抗體可用，而借助親和素包板，吸附生物素標(biāo)記抗體，爾后再檢測抗原時，這對抗體檢測臨床抗原效果卻特別不理想，請問在這種情況下，調(diào)節(jié)反應(yīng)緩沖液，可以解決問題嗎，還是這對抗體本身不適合于親和素間接包板，求大俠支招 |
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hbl215
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2樓2014-05-28 12:22:59
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3樓2014-05-29 15:48:59
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4樓2014-05-29 16:31:08
【答案】應(yīng)助回帖
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既然直接包被抗體測定抗原的效果還可以的話，為什么還要加上生物素-鏈酶親和素的系統(tǒng)呢？是為了放大信號，增加靈敏度？ 增加了一個系統(tǒng)，就多了一分風(fēng)險，生物素標(biāo)記抗體，如果標(biāo)記處理不好的話，就影響到整個反應(yīng)體系了，所以能不用就不用吧。而且如果是為了增加靈敏度，還可以生物素-親和素系統(tǒng)放在后面，即生物素標(biāo)記原來的酶標(biāo)抗體，鏈酶親和素標(biāo)記HRP。 如果一定要用生物素的話，建議選擇側(cè)鏈比較長的生物素，可以降低空間位阻對抗原抗體反應(yīng)的影響。而且注意生物素標(biāo)記抗體的方法不能有問題，最好是買生物素標(biāo)記的試劑盒來標(biāo)記生物素。 另外，你這是雙抗體夾心法檢測抗原，如果你的抗體都是鼠單抗的話，你要避免反應(yīng)體系里的異嗜性干擾，即RF因子和HAMA對檢測的影響，這種影響是會造成假陽性的。 |
5樓2014-06-06 20:42:14
henggd
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6樓2015-05-08 10:03:40
【答案】應(yīng)助回帖
| 大概知道你們做的系統(tǒng)是啥樣子的 估計都是親和素的板，第一步都是加生物素化的抗原抗體進(jìn)去。檢測臨床樣本不理想，具體是個什么情況？1. 有可能生物素化影響了抗體的活性，標(biāo)記到了抗體的CDR區(qū)對抗原抗體結(jié)合形成了空間位阻。2.生物素化是隨機(jī)與抗體的某些游離基團(tuán)結(jié)合，可能結(jié)合到抗體的Fc端也可能結(jié)合到兩個結(jié)合臂。所以被親和素捕獲后可能結(jié)合臂暴露在外 可能Fc暴露在外。這也會造成與直接包被反應(yīng)性的不一致。3. 親和素的板是否封閉完全也會影響結(jié)果。所以還是得根據(jù)你的結(jié)果調(diào)整。有些是可以根據(jù)調(diào)整緩沖液啥的可以調(diào)回來的。有些未必。 |
7樓2015-05-12 10:08:29
8樓2016-11-11 14:09:27
yyy0305
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9樓2016-11-16 17:28:27
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