 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2799 | 回復(fù): 8 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
藍(lán)默兒金蟲 (小有名氣)
|
[求助]
夾心ELISA，陰性值、空白值過(guò)高。 已有4人參與
|
||
|
一、酶標(biāo)抗體是我自己的標(biāo)記的，用原核表達(dá)的蛋白（1微克/ml）包被驗(yàn)證，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照，酶標(biāo)抗體稀釋1：:10000時(shí)，OD值=1.0， 建夾心ELISA方法：1.用方陣法確定多抗和酶標(biāo)抗體稀釋濃度都為1:2000時(shí)，OD值=1.0左右 2.鼠源多抗包被（稀釋度1:2000）；封閉液為5%脫脂乳封閉，37°，2h；抗原為純化的蛋白（2微克/ml，），同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照（胎牛血清），空白對(duì)照（PBS）；用標(biāo)記的酶標(biāo)抗體進(jìn)行檢測(cè)（稀釋度1:2000），之后TMB顯色，終止讀數(shù)。陽(yáng)性O(shè)D值=1.0左右，陰性O(shè)D值=0.8左右、空白OD值=0.8左右。 3，為什么陰性值，空白值那么高，難到酶標(biāo)單抗與多抗反應(yīng)了，不應(yīng)該�。渴笤炊嗫购褪笤磫慰狗磻�(yīng)了？ 4，感覺(jué)也不是封閉液的問(wèn)題，板子不包被，直接封閉液為5%脫脂乳封閉，37°，2h，加酶標(biāo)抗體進(jìn)行檢測(cè)，OD值=0.15以下。 之后我又用單抗包被，結(jié)果一樣：陰性、空白值好高。 1.包被：將三種單抗混合，1：1000，1:2000,1:4000......1:128000稀釋，做三個(gè)平行，4°過(guò)夜。 2.第二天洗滌4次，每次3min，拍干。5%脫脂乳封閉，37°，2h。 3.洗滌4次，每次3min，拍干。加抗原（為純化好的原核表達(dá)蛋白）稀釋濃度為2微克/ml，同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照（胎牛血清1：100稀釋），空白對(duì)照（PBS溶液)。37°，1h。 4.洗滌4次，每次3min，拍干。加酶標(biāo)抗體（1:1000稀釋），37°，1h。 5.洗滌4次，每次3min，拍干。加TMB顯色，每孔100微升。37°，10min。 6.2M硫酸終止， 7.OD450讀數(shù)。 結(jié)果，陽(yáng)性值2.5，陰性對(duì)照和空白值很高可達(dá)到1.5。 之后我又用細(xì)胞上清包被，其他和上面一樣，加酶標(biāo)抗體（1:1000稀釋），封閉用的是1%明膠和2%的BSA，2%的BSA封閉：陰性值1.8，陽(yáng)性和空白值都在2.0以上。1%明膠封閉：陰性值1.0，陽(yáng)性和空白值都在2.0以上 |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 專業(yè)相關(guān) |
» 猜你喜歡
323求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
一志愿北京化工大學(xué) 070300 學(xué)碩 336分 求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
352求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
一志愿東華大學(xué)化學(xué)070300，求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
277材料科學(xué)與工程080500求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
317求調(diào)劑
已經(jīng)有18人回復(fù)
-
293求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
280分求調(diào)劑 一志愿085802
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
0854電子信息求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
263求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 兩種單抗夾心ELISA方法的建立
已經(jīng)有3人回復(fù)
- ELISA空白值過(guò)高
已經(jīng)有5人回復(fù)
- ELISA空白值在0.05-0.08正常嗎？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 做總磷空白值高
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 雙抗體夾心ELISA，陽(yáng)性孔，樣品孔和陰性對(duì)照全部不顯色，怎么回事
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 雙抗夾心ELISA 空白值偏高
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 雙抗體夾心ELISA，陰性值很高，怎么回事呢
已經(jīng)有41人回復(fù)
- ELISA 顯色液空白OD偏高，P/N偏小，是否可以每孔OD減去顯色液對(duì)照的值?
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】雙抗體夾心ELISA的空白孔該怎么設(shè)置？
已經(jīng)有6人回復(fù)
9樓2015-08-16 09:54:40
逍瀟
鐵桿木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 45 (小學(xué)生)
- 金幣: 5442.1
- 散金: 20
- 紅花: 6
- 帖子: 1137
- 在線: 385.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 487765
- 注冊(cè): 2007-12-28
- 性別: MM
- 專業(yè): 化學(xué)環(huán)境污染與健康
2樓2014-06-11 16:46:57
藍(lán)默兒
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1281.8
- 散金: 19
- 帖子: 80
- 在線: 88.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 1695664
- 注冊(cè): 2012-03-16
- 性別: MM
- 專業(yè): 獸醫(yī)傳染病學(xué)
3樓2014-06-11 17:53:58
wys476488620
金蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 1
- 應(yīng)助: 22 (小學(xué)生)
- 金幣: 667.5
- 散金: 100
- 紅花: 1
- 帖子: 487
- 在線: 81.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 1785165
- 注冊(cè): 2012-04-28
- 性別: GG
- 專業(yè): 獸醫(yī)免疫學(xué)
4樓2014-06-11 19:01:45
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿北京化工大學(xué) 070300 學(xué)碩 336分 求調(diào)劑 +4 | vv迷 2026-03-22 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求調(diào)劑一志愿海大，0703化學(xué)學(xué)碩304分，有大創(chuàng)項(xiàng)目，四級(jí)已過(guò) +6 | 幸運(yùn)哩哩 2026-03-22 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +3 | 墨墨漠 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +12 | zjl的號(hào) 2026-03-16 | 17/850 |
|
|
|
[考研] 一志愿中南大學(xué)化學(xué)學(xué)碩0703總分337求調(diào)劑 +3 | niko- 2026-03-22 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 269專碩求調(diào)劑 +6 | 金恩貝 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | Auroracx 2026-03-22 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +4 | 來(lái)好運(yùn)來(lái)來(lái)來(lái) 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 354求調(diào)劑 +7 | Tyoumou 2026-03-18 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +3 | 邱gl 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +12 | 呼呼呼。。。。 2026-03-17 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +3 | 哇呼哼呼哼 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 330求調(diào)劑0854 +3 | assdll 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 南昌大學(xué)材料專碩311分求調(diào)劑 +6 | 77chaselx 2026-03-20 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿武理材料305分求調(diào)劑 +6 | 想上岸的鯉魚 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿中海洋材料工程專碩330分求調(diào)劑 +8 | 小材化本科 2026-03-18 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿武漢理工材料工程專碩調(diào)劑 +9 | Doleres 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0817 化學(xué)工程 299分求調(diào)劑 有科研經(jīng)歷 有二區(qū)文章 +22 | rare12345 2026-03-18 | 22/1100 |
|
|
|
[考研] 295材料求調(diào)劑，一志愿武漢理工085601專碩 +5 | Charlieyq 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | @taotao 2026-03-20 | 3/150 |
|