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厚德求是木蟲 (著名寫手)
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[求助]
大腸桿菌BL-21（DE3）是否自帶降解外源重組蛋白的蛋白酶？ 已有1人參與
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如題所示，本人想向知情者討教關(guān)于“大腸桿菌BL-21（DE3）是否自帶降解外源重組蛋白的蛋白酶”的問題。 事情是這樣的，本人所做課題是關(guān)于提高某酶蛋白的熱穩(wěn)定性的。因此，在研究其熱穩(wěn)定性的時候，設(shè)計(jì)測定這個酶在某一溫度（例如40℃）下的半衰期。而在實(shí)驗(yàn)過程中出現(xiàn)的問題是：酶在40℃下的半衰期太短了，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)反應(yīng)出來的半衰期竟然是1,2分鐘；在其最適反應(yīng)溫度30℃下也超不過15min。但這個酶早在實(shí)際生產(chǎn)中得到了應(yīng)用，將同樣的帶有重組蛋白基因質(zhì)粒的大腸桿菌BL-21（DE3）做固定化，30℃左右生產(chǎn)可以達(dá)到半年時間。 因此我們在思考這個酶在破胞&熱處理后的失活原因（破胞后不做熱處理的粗酶，酶活還是正常的）。 有一種觀點(diǎn)是說大腸桿菌宿主內(nèi)的蛋白酶將外源重組蛋白降解了，因此我想請教各位的是，大腸桿菌BL-21（DE3）是不是自己帶降解外源重組蛋白的蛋白酶，把我的外源重組蛋白水解了？如果不是，那么是什么讓這個酶蛋白失活如此之快。 第二種觀點(diǎn)是破胞后的蛋白質(zhì)溶液組分復(fù)雜，不同的蛋白質(zhì)在溫度升高的時候相互作用，纏繞，使得目的酶蛋白失活。是否把帶有His標(biāo)簽的酶從粗酶液中純化后熱穩(wěn)定性會有提升？ |
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