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sars37

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[求助] 質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染問(wèn)題，瞬轉(zhuǎn)。已有1人參與

小弟想做一個(gè)家族基因的3個(gè)亞族共轉(zhuǎn)染，目前質(zhì)粒已經(jīng)構(gòu)建好了，也單個(gè)轉(zhuǎn)染看了下免疫熒光，現(xiàn)在想把3個(gè)不同的質(zhì)粒一起轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，瞬轉(zhuǎn)即可（考慮到抗性基因都一樣，而且篩穩(wěn)轉(zhuǎn)太難），想問(wèn)一下各位大蝦，3個(gè)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的濃度應(yīng)該怎么確定？是3個(gè)質(zhì)粒的濃度加起來(lái)跟說(shuō)明書上要求的一樣么？用的是英俊的LIP2000轉(zhuǎn)染試劑，3個(gè)質(zhì)粒都是裝在PCDNA3.1+上，并且都裝了CMYC標(biāo)簽蛋白（因?yàn)檫@3個(gè)基因市面上都沒(méi)有可用的抗體，所以裝了這個(gè)標(biāo)簽）。

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1樓 2014-06-12 09:39:14

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sars37: 金幣+9 2014-06-13 15:17:59

三個(gè)質(zhì)粒的總量加起來(lái)最好不超過(guò)1ug，如果要轉(zhuǎn)染的量確實(shí)很多，可以分開(kāi)轉(zhuǎn)啊~不然，很容易造成轉(zhuǎn)染不平衡的~

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2樓2014-06-12 15:58:18

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2樓: Originally posted by 新生代力量 at 2014-06-12 15:58:18
三個(gè)質(zhì)粒的總量加起來(lái)最好不超過(guò)1ug，如果要轉(zhuǎn)染的量確實(shí)很多，可以分開(kāi)轉(zhuǎn)啊~不然，很容易造成轉(zhuǎn)染不平衡的~

比如轉(zhuǎn)6孔板，說(shuō)明書的要求是2.5ug，那我3種質(zhì)粒的濃度加起來(lái)也不能超過(guò)1ug嗎？其實(shí)我不用考慮轉(zhuǎn)染不平衡，只要3中質(zhì)粒都轉(zhuǎn)進(jìn)去就可以了。

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3樓2014-06-13 15:16:32

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引用回帖:

比如說(shuō)轉(zhuǎn)染6孔板，說(shuō)明書上要求是2.5ug，那我3種質(zhì)粒加起來(lái)的濃度也不能超過(guò)1ug嗎？其實(shí)我不用考慮轉(zhuǎn)染不平衡，只要3種質(zhì)粒都轉(zhuǎn)進(jìn)去就好了。

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4樓2014-06-13 15:17:48

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3樓: Originally posted by sars37 at 2014-06-13 15:16:32
比如轉(zhuǎn)6孔板，說(shuō)明書的要求是2.5ug，那我3種質(zhì)粒的濃度加起來(lái)也不能超過(guò)1ug嗎？其實(shí)我不用考慮轉(zhuǎn)染不平衡，只要3中質(zhì)粒都轉(zhuǎn)進(jìn)去就可以了。...

問(wèn)一下樓主這個(gè)問(wèn)題解決了嗎？最近我要做泛素化，要轉(zhuǎn)泛素和另一個(gè)質(zhì)粒進(jìn)去，這兩個(gè)質(zhì)�？偭亢推綍r(shí)單轉(zhuǎn)一個(gè)質(zhì)粒一樣嗎？?jī)蓚€(gè)質(zhì)粒劑量各占一半還是按照別的什么分配的呢？多謝！

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5樓2017-06-06 20:45:29

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