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1樓 2014-06-16 11:12:05

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buxiangxue: 金幣+2 2014-06-16 11:27:47

蛋白濃度太低了，可以重新定量試試

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buxiangxue

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2樓2014-06-16 11:13:28

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yangfanv

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樓主制備樣品之前做個定量～～很顯然圖中的樣品量肯定沒有達到樓主說的15ug～～不然考染后肯定很清楚～～

路要慢慢地走～但不能停

4樓2014-06-16 17:40:41

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ganchao1776

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看你圖的樣子，條帶很彌散，好像蛋白被降解了，我估計你要重新做，下次做的時候加些蛋白酶抑制劑。你測到的含數(shù)據(jù)是準確的，但反應(yīng)的不是蛋白的

7樓2014-06-17 09:11:54

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可以做個梯度，從5ul，10ul，15ul，20ul。。。找個最合適的梯度，一塊膠就可以比較出來了

8樓2014-06-17 09:14:32

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anyaxiong

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上樣量太少，SDS-PAGE考染靈敏度在單條帶0.1ug，低了就銀染吧，要不就蛋白濃縮，加大上樣量

愛拼才會贏

18樓2014-06-20 22:34:40

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buxiangxue

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送紅花一朵

引用回帖:

2樓: Originally posted by HYZ221314 at 2014-06-16 11:13:28
蛋白濃度太低了，可以重新定量試試

大概定量到多少呢

3樓2014-06-16 11:17:07

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wangxueflower

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上樣量好像太少了，加大上樣量吧

花開花落，云卷云舒

5樓2014-06-16 21:35:12

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4樓: Originally posted by yangfanv at 2014-06-16 17:40:41
樓主制備樣品之前做個定量～～很顯然圖中的樣品量肯定沒有達到樓主說的15ug～～不然考染后肯定很清楚～～

怎樣做定量，我做標準曲線了測的蛋白濃度23 μg/μl 和 9μg/μl 然后上樣體積是10μl 上樣蛋白就是20μg 的這種比例上的樣

6樓2014-06-17 08:47:47

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7樓: Originally posted by ganchao1776 at 2014-06-17 09:11:54
看你圖的樣子，條帶很彌散，好像蛋白被降解了，我估計你要重新做，下次做的時候加些蛋白酶抑制劑。你測到的含數(shù)據(jù)是準確的，但反應(yīng)的不是蛋白的

條帶是彌散的么，我剛做蛋白沒經(jīng)驗蛋白被降解？我的蛋白是固體保存的用樣品處理液處理過之后蛋白不就變性了嘛不過處理的時候都是常溫，哪里有問題，求指教

9樓2014-06-17 11:36:17

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6樓: Originally posted by buxiangxue at 2014-06-17 08:47:47
怎樣做定量，我做標準曲線了測的蛋白濃度23 μg/μl 和 9μg/μl 然后上樣體積是10μl 上樣蛋白就是20μg 的這種比例上的樣

...

23ug/ug！�。�！樓主肯定搞錯了～～樓主定量怎么定的