 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2363 | 回復: 2 | ||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
SHUHUI1988新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
急急急，熒光定量PCR引物及擴增效率求助~~~~~~~~~~~~~~~~
|
|
|
這段時間一直在做定量PCR，是做室內(nèi)純菌培養(yǎng)的功能基因，所用的質粒是找測序公司 合成的，然后返回的大腸桿菌，我自己培養(yǎng)后用qiagen試劑盒提取的，DNA是純菌提取RNA后反轉錄得到。然后一開始使用提取的質粒直接作為模板做標準曲線，所有的標曲基本上R2值都可以在0.997~1左右，然后有一個基因glk基因擴增效率還不錯102%左右，后面連著標曲和樣品一起做，擴增效率也差不多，另外兩個基因soxb基因一個擴增效率一直在80%左右甚至60%多，另一個基因cbbl基因基本上稀釋梯度第三個之后的梯度就擴不出來的，在做標曲之前有做了定量，三個基因的反轉錄得到的DNA濃度基本上差不多。 后面聽大家說，那個是傳統(tǒng)的方法，現(xiàn)在發(fā)文章好像是要求不能直接用環(huán)狀質粒做標曲的模板，需要線性化，然后我根據(jù)一個師兄的建議，直接用載體引物PCR跑膠后進行膠回收來純化的DNA，試劑盒也是qiagen的，結果這樣得到的純化后的DNA去做標曲，glk和soxb基因的標曲，R2值還是0.997~1左右，擴增效率卻一直在80%~90%直接，勉強偶爾到91%、92%左右但卻沒有重復性，而且也有做退火溫度梯度，從52~65℃左右，基本上都是80%多，沒有明顯的差，兩個基因都做退火溫度梯度了。也有把引物量提高，把體系中DNA的量也有該，各種都試了都不行，然后我做定量PCR的試劑盒是gotaq的試劑盒，里面的酶什么都是混合好的MIX，不知道應該下一步怎么繼續(xù)了。另一個cbbl基因干脆擴增效率60%，懷疑是引物問題，重新又設計了3對引物，結果今天用這三對引物做溫度梯度，溶解曲線都是亂的，不知道是引物二聚體太多還是什么。。。 已經(jīng)是延期畢業(yè)了，實驗還是沒有進展，快要撐不住了�。。。。。。。。�！求助~~~~~~~~~~~~~~~ 還有，有人做過cbbl、glk、soxb、zwf、edd、eda這些基因的熒光定量么，有沒有比較好的引物推薦~~~~~~~~~~~~~~~ 謝謝�。。。。。。。。。。。。�！ |
回復此樓» 猜你喜歡
蛋白質檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有101人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
-
留學--博士招生
已經(jīng)有15人回復
-
化學工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復
» 本主題相關商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 熒光定量標準曲線問題��！急急急！在線等答案
已經(jīng)有3人回復
- 你們的熒光定量檢測引物擴增的標準曲線問題！求指教
已經(jīng)有4人回復
- 熒光定量PCR引物設計
已經(jīng)有8人回復
- 求助熒光定量PCR引物設計
已經(jīng)有12人回復
- 熒光定量引物問題
已經(jīng)有4人回復
- 熒光定量，怎么驗證引物效率呢
已經(jīng)有6人回復
- 關于熒光定量PCR引物設計的問題
已經(jīng)有7人回復
- 求助熒光定量引物驗證？
已經(jīng)有3人回復
- 跪求幫忙設計個熒光定量PCR的引物
已經(jīng)有6人回復
- 熒光定量擴增效率問題
已經(jīng)有6人回復
- 熒光定量pcr,以及內(nèi)參基因的選擇。
已經(jīng)有4人回復
- 求助熒光定量PCR統(tǒng)計方法
已經(jīng)有7人回復
- 熒光定量PCR擴增效率低
已經(jīng)有16人回復
- 關于實時熒光定量引物設計
已經(jīng)有5人回復
- 熒光定量內(nèi)參基因引物的設計
已經(jīng)有6人回復
- 熒光定量引物設計
已經(jīng)有4人回復
- 定量PCR擴增效率過高(SYBR)
已經(jīng)有3人回復
- 求解：Taqman MGB實時熒光定量PCR空白對照組熒光信號很強怎么回事？
已經(jīng)有10人回復
- 熒光定量PCR。。。求助求助
已經(jīng)有17人回復
- 熒光定量擴增效率低怎么辦
已經(jīng)有3人回復
- PCR引物擴增的問題
已經(jīng)有5人回復
- 【求助/交流】實時熒光定量PCR的擴增效率低該如何改進？
已經(jīng)有5人回復
- 【求助/交流】熒光定量PCR引物跨內(nèi)含子的問題
已經(jīng)有9人回復
- 【求助/交流】熒光定量pcr
已經(jīng)有11人回復
二月smile
新蟲 (初入文壇)
- 應助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 163.8
- 帖子: 46
- 在線: 36.4小時
- 蟲號: 3754835
- 注冊: 2015-03-21
- 性別: MM
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學
3樓2015-07-04 16:36:08
jifengyun321
新蟲 (正式寫手)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1146.2
- 散金: 570
- 紅花: 3
- 帖子: 310
- 在線: 150.1小時
- 蟲號: 3304811
- 注冊: 2014-07-03
- 專業(yè): 微生物生態(tài)學
2樓2014-08-22 16:11:08
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研]
材料調(diào)劑
 5+3
|
想要一壺桃花水 2026-03-25 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 材料與化工328分調(diào)劑 +6 | 。，。，。，。i 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑 +4 | .m.. 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 086000生物與醫(yī)藥292求調(diào)劑 +4 | 小小陳小小 2026-03-22 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 287求調(diào)劑 +10 | 晨昏線與星海 2026-03-19 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +3 | plum李子 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 化學調(diào)劑 +6 | yzysaa 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿武理085500機械專業(yè)總分300求調(diào)劑 +3 | an10101 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +4 | 13853210211 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 化工專碩求調(diào)劑 +3 | question挽風 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿山東大學藥學學碩求調(diào)劑 +3 | 開開心心沒煩惱 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 335求調(diào)劑 +4 | yuyu宇 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[論文投稿] 急發(fā)核心期刊論文 +3 | 賢達問津 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工306 +4 | z1z2z3879 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑 +5 | @taotao 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +3 | 呼呼？~+123456 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿深大，0703化學，總分302，求調(diào)劑 +4 | 七月-七七 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0703化學297求調(diào)劑 +3 | Daisy☆ 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 086500 325 求調(diào)劑 +3 | 領帶小熊 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料考研調(diào)劑 +3 | xwt。 2026-03-19 | 3/150 |
|