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zhaoxinrui0511金蟲 (小有名氣)
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[求助]
如何獲得含有內(nèi)含子基因的完整cDNA序列？ 已有4人參與
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我要擴增的是一個黑曲霉基因（含有兩段內(nèi)含子）的cDNA序列，基因結(jié)構(gòu)是這樣的： 1-186是外顯子（186 bp） 187-232是內(nèi)含子 233-313是外顯子（81 bp） 314-362是內(nèi)含子 363-1583是外顯子（1221 bp） 之前嘗試了分別用PCR擴增三段外顯子，再用融合PCR的方法連接，但由于前兩個外顯子片段太短而失敗了， 請問有其他什么好辦法嗎？ |
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exon2002
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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16樓2014-06-30 06:26:46
lone007
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 鼓勵交流 2014-06-22 11:32:34
zhaoxinrui0511: 金幣+2, ★★★很有幫助, 不好意思，可能是我沒表述清楚，我需要的是沒有內(nèi)含子的基因序列，除了RT之外，還有其他的方法嗎 2014-06-22 16:08:03
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kx444555: 金幣+3, 鼓勵交流 2014-06-22 11:32:34
zhaoxinrui0511: 金幣+2, ★★★很有幫助, 不好意思，可能是我沒表述清楚，我需要的是沒有內(nèi)含子的基因序列，除了RT之外，還有其他的方法嗎 2014-06-22 16:08:03
| cDNA的定義是：以成熟mRNA為模板在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成DNA單鏈，之后在DNA聚合酶的作用下合成的雙鏈DNA。成熟的mRNA是不含有內(nèi)含子的，因此，cDNA可以視為是基因組全部外顯子的集合，無論你怎么擴都不會包含內(nèi)含子。 |
2樓2014-06-22 08:42:49
liuderong
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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3樓2014-06-22 09:35:36
這是馬甲
至尊木蟲 (著名寫手)
誰的馬甲都不是
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4樓2014-06-22 09:56:42
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