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zhaoxinrui0511金蟲 (小有名氣)
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[求助]
如何獲得含有內(nèi)含子基因的完整cDNA序列？ 已有4人參與
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我要擴(kuò)增的是一個(gè)黑曲霉基因（含有兩段內(nèi)含子）的cDNA序列，基因結(jié)構(gòu)是這樣的： 1-186是外顯子（186 bp） 187-232是內(nèi)含子 233-313是外顯子（81 bp） 314-362是內(nèi)含子 363-1583是外顯子（1221 bp） 之前嘗試了分別用PCR擴(kuò)增三段外顯子，再用融合PCR的方法連接，但由于前兩個(gè)外顯子片段太短而失敗了， 請問有其他什么好辦法嗎？ |
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5樓2014-06-22 11:58:23
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zhaoxinrui0511: 金幣+2, ★★★很有幫助, 不好意思，可能是我沒表述清楚，我需要的是沒有內(nèi)含子的基因序列，除了RT之外，還有其他的方法嗎 2014-06-22 16:08:03
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| cDNA的定義是：以成熟mRNA為模板在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成DNA單鏈，之后在DNA聚合酶的作用下合成的雙鏈DNA。成熟的mRNA是不含有內(nèi)含子的，因此，cDNA可以視為是基因組全部外顯子的集合，無論你怎么擴(kuò)都不會(huì)包含內(nèi)含子。 |
2樓2014-06-22 08:42:49
這是馬甲
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4樓2014-06-22 09:56:42
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就按照你之前融合PCR的作法 第一段可以用引物擴(kuò)出來 第二段合成兩條長引物相互退火延伸就行 再將前兩段先融合 最后剩下的就好辦了吧 但是這樣步驟比較多 費(fèi)事 要是有錢干脆買個(gè)反轉(zhuǎn)錄試劑盒 [ 發(fā)自小木蟲客戶端 ] |
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zhaoxinrui051114樓2014-06-23 00:30:39
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8樓2014-06-22 16:05:02
zhaoxinrui0511
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9樓2014-06-22 16:06:12
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應(yīng)用NCBI查找連續(xù)的mRNA(含內(nèi)含子)、cDNA、蛋白序列 http://www.doc88.com/p-676405989477.html |
10樓2014-06-22 16:30:39
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