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zhaoxinrui0511金蟲 (小有名氣)
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[求助]
如何獲得含有內(nèi)含子基因的完整cDNA序列? 已有4人參與
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我要擴(kuò)增的是一個(gè)黑曲霉基因(含有兩段內(nèi)含子)的cDNA序列,基因結(jié)構(gòu)是這樣的: 1-186是外顯子(186 bp) 187-232是內(nèi)含子 233-313是外顯子(81 bp) 314-362是內(nèi)含子 363-1583是外顯子(1221 bp) 之前嘗試了分別用PCR擴(kuò)增三段外顯子,再用融合PCR的方法連接,但由于前兩個(gè)外顯子片段太短而失敗了, 請(qǐng)問有其他什么好辦法嗎? |
至尊木蟲 (著名寫手)
誰的馬甲都不是

捐助貴賓 (正式寫手)
| cDNA的定義是:以成熟mRNA為模板在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成DNA單鏈,之后在DNA聚合酶的作用下合成的雙鏈DNA。成熟的mRNA是不含有內(nèi)含子的,因此,cDNA可以視為是基因組全部外顯子的集合,無論你怎么擴(kuò)都不會(huì)包含內(nèi)含子。 |

鐵桿木蟲 (正式寫手)
捐助貴賓 (正式寫手)

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