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zhuangkai520金蟲 (小有名氣)
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[求助]
定量 擴(kuò)增效率變低了怎么回事 已有1人參與
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| 以前好好的， 現(xiàn)在擴(kuò)增效率突然變到50%多，引物換過，質(zhì)粒也重新提取過？難道是takara的試劑問題？？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
zhuangkai520: 金幣+20, ★有幫助 2014-06-30 15:31:11
gyesang: 金幣+5, 鼓勵(lì)回帖交流經(jīng)驗(yàn)！ 2014-07-01 17:12:40
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gyesang: 金幣+5, 鼓勵(lì)回帖交流經(jīng)驗(yàn)！ 2014-07-01 17:12:40
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有這樣的幾種可能：反應(yīng)試劑中部分成分特別是熒光染料有降解；反應(yīng)條件不夠優(yōu)化，可以適當(dāng)降低退火溫度或改為三步法擴(kuò)增；pcr反應(yīng)體系中有抑制物，一般是加入模板時(shí)引入，需要將模板稀釋從而降低抑制物量。 我曾經(jīng)有次是擴(kuò)增效率在80%，主要考慮因?yàn)橐锪可倌０鍥]有反應(yīng)完全，然后經(jīng)過多加了0.1ul的引物量而使擴(kuò)增效率上去的。 希望對(duì)你有幫助 |
2樓2014-06-30 08:26:09
zhuangkai520
金蟲 (小有名氣)
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3樓2014-06-30 15:30:59
4樓2014-07-01 07:59:31
zhuangkai520
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5樓2014-07-01 15:34:33
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