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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » RT-PCR擴增效率
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[求助]
RT-PCR擴增效率
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| 我剛開始做RT-PCR，用的是儀器是7500，熒光燃料法，做標線時擴增效率總是在一百十幾。求解決方法。 |
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 核酸生物學實驗經驗 |
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cicelyzh
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1、樓主做的是qRT-PCR。 2、擴增效率過高，通常是引物引起的，引物使得非特異性條帶（不是目的基因）大量產生，機器將這些非特異性條帶的信號全部接受了，導致擴增效率過大。 3、qRT-PCR擴增效率正常值為95%-105%。 4、解決辦法：更換引物，引物的pcr產物片段控制在200bp-300bp（我記得是，你再查查文獻）。 |
5樓2013-08-25 18:41:45
cicelyzh
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