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[求助]
RT-PCR擴(kuò)增效率
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| 我剛開始做RT-PCR,用的是儀器是7500,熒光燃料法,做標(biāo)線時(shí)擴(kuò)增效率總是在一百十幾。求解決方法。 |
核酸生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
金蟲 (正式寫手)

鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
金蟲 (小有名氣)
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1、樓主做的是qRT-PCR。 2、擴(kuò)增效率過高,通常是引物引起的,引物使得非特異性條帶(不是目的基因)大量產(chǎn)生,機(jī)器將這些非特異性條帶的信號(hào)全部接受了,導(dǎo)致擴(kuò)增效率過大。 3、qRT-PCR擴(kuò)增效率正常值為95%-105%。 4、解決辦法:更換引物,引物的pcr產(chǎn)物片段控制在200bp-300bp(我記得是,你再查查文獻(xiàn))。 |
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