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[求助]
RT-PCR擴(kuò)增效率
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| 我剛開(kāi)始做RT-PCR，用的是儀器是7500，熒光燃料法，做標(biāo)線時(shí)擴(kuò)增效率總是在一百十幾。求解決方法。 |
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cicelyzh
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1、樓主做的是qRT-PCR。 2、擴(kuò)增效率過(guò)高，通常是引物引起的，引物使得非特異性條帶（不是目的基因）大量產(chǎn)生，機(jī)器將這些非特異性條帶的信號(hào)全部接受了，導(dǎo)致擴(kuò)增效率過(guò)大。 3、qRT-PCR擴(kuò)增效率正常值為95%-105%。 4、解決辦法：更換引物，引物的pcr產(chǎn)物片段控制在200bp-300bp（我記得是，你再查查文獻(xiàn)）。 |
5樓2013-08-25 18:41:45
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