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請(qǐng)教為什Western Blot一定要用兩種抗體？ 已有3人參與
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通常Western Blot中都使用兩種抗體進(jìn)行顯色，為什么不能用一種呢？例如直接用連接了HRP的抗體檢測(cè)抗原，然后顯色呢？ 請(qǐng)高手指點(diǎn)！ |
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 蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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dragon2013
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其他人都說(shuō)了用兩種抗體的作用，放大信號(hào)。也可以用一種，在目的蛋白中加上生物素標(biāo)簽，利用鏈霉素親和的抗體（Streptavidin-HRP）就可以。但會(huì)有以一下問(wèn)題：1.在用脫脂奶粉時(shí)會(huì)出現(xiàn)一些背景，因?yàn)樵诿撝谭壑袝?huì)有生物素化的成分。2.會(huì)出現(xiàn)非特異條帶，在提取蛋白中出目的條帶外也會(huì)出現(xiàn)其他的生物素化的蛋白。 利用鏈霉素親和的抗體，主要用于蛋白分離純化，因?yàn)樯锼鼗牡鞍着cStreptavidin的作用較強(qiáng)可以使用更為劇烈的條件，例如可以將SDS達(dá)到1%洗脫�，F(xiàn)在好多研究蛋白相互作用的都使用這種方法。 |
7樓2014-07-22 20:09:58
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4樓2014-07-08 11:20:06
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