 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1564 | 回復(fù): 7 | ||||
monster_zeh金蟲 (小有名氣)
|
[求助]
怎么確定一種生物中是否有某種酶 已有1人參與
|
|
一種生物中是否有纖維素酶、溶菌酶、脂肪酶等等。 各位大俠，我是新手，請(qǐng)不吝賜教。 |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
» 猜你喜歡
304求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
材料工程專碩調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
一志愿天大材料與化工（085600）總分338
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
085700資源與環(huán)境308求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
求材料調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
294求調(diào)劑材料與化工專碩
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
一志愿華中科技大學(xué)，080502，354分求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
一志愿吉林大學(xué)材料學(xué)碩321求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
085410人工智能專碩317求調(diào)劑（0854都可以）
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
330求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 檢測(cè)復(fù)合微生物菌劑中的酶活，要怎么檢測(cè)？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 求助酶聯(lián)免疫的問題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 用什么方法判斷某種細(xì)菌中是否含有某種酶？
已經(jīng)有10人回復(fù)
- BsaI的酶切位點(diǎn)怎么看？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 鑒定蛋白質(zhì)是否酶解完全的方法有哪些
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 求一個(gè)化合物對(duì)一種酶的抑制類型
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 有沒有酶芯片這么一種東西？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 請(qǐng)問各位大俠有知道怎么通過酶學(xué)性質(zhì)分析來判斷某一個(gè)酶在胞內(nèi)還是胞外呢，謝啦��！
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 我可能發(fā)現(xiàn)了一種新奇的生物發(fā)光現(xiàn)象
已經(jīng)有50人回復(fù)
- 微生物發(fā)酵液中蛋白酶的種類如何界定？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 蛋白質(zhì)酶解液中如何確定酶解完全
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 如何獲得一個(gè)酶的基因
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 生物酶降解污染物中的一個(gè)問題
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 通過微生物發(fā)酵得到一種酶，需要做哪些實(shí)驗(yàn)來鑒定是不是新酶？
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 酶分子直徑的確定
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 大家討論一下生物界中存在的酶（三維空間尺寸）最小的是哪一個(gè)
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 怎樣辨別區(qū)分一個(gè)酶是組成型還是誘導(dǎo)型？根據(jù)什么的？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 不同來源的同一種微生物基因序列是否相同
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 不同來源的同一種微生物基因序列是否相同
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 酶切質(zhì)粒時(shí)，怎樣鑒定質(zhì)粒是否被切開了�。�
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】如何確定酶聯(lián)免疫的顯色時(shí)間
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】原核表達(dá)羊基因，cDNA長(zhǎng)度約為3kb，基因?yàn)橐环N有活性的酶
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 【求助/交流】酶切時(shí)間確定？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】如何確定微生物代謝物的生物合成關(guān)鍵酶
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】新手請(qǐng)教如何對(duì)不同物種中某一酶的氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)再設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物啊?/a>
已經(jīng)有10人回復(fù)
monster_zeh
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1583.3
- 散金: 10
- 紅花: 1
- 帖子: 293
- 在線: 268.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 1391477
- 注冊(cè): 2011-09-05
- 性別: GG
- 專業(yè): 中藥藥效物質(zhì)
2樓2014-07-09 08:41:21
polypro
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 197 (高中生)
- 金幣: 3921.3
- 散金: 160
- 紅花: 22
- 帖子: 512
- 在線: 62.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 1809438
- 注冊(cè): 2012-05-11
- 性別: GG
- 專業(yè): 理論和計(jì)算化學(xué)
3樓2014-07-09 09:13:46
monster_zeh
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1583.3
- 散金: 10
- 紅花: 1
- 帖子: 293
- 在線: 268.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 1391477
- 注冊(cè): 2011-09-05
- 性別: GG
- 專業(yè): 中藥藥效物質(zhì)
4樓2014-07-09 09:26:16
凌波麗
專家顧問 (知名作家)
-
專家經(jīng)驗(yàn): +218 - BioEPI: 11
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.044
- 金幣: 2118.9
- 散金: 10
- 紅花: 208
- 帖子: 5633
- 在線: 571.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 1766465
- 注冊(cè): 2012-04-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)綜合
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
|
樣品中的特定的酶是否存在的實(shí)驗(yàn)檢測(cè)方法 I.最簡(jiǎn)單的一種方法：測(cè)定樣品中有沒有纖維素酶、溶菌酶、脂肪酶等酶的生物活性，如果酶的活性沒有被抑制的話，也可以同時(shí)用有關(guān)的特定的酶的特征的紅外、可見光、紫外光光譜、原子光譜分析進(jìn)行測(cè)定，尤其是這些酶有一些象NADH、FADH之類有機(jī)小分子輔基或輔酶或者含有有金屬離子時(shí)，后者用原子光譜分析。 但是以上只是證明樣品中可能有纖維素酶、溶菌酶、脂肪酶等酶，有可能存在與它們有同樣活性的其他物質(zhì)，甚至還不一定就是別的同種活性的生物酶。 II。精確的方法（沒有查到祥光酶的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)試驗(yàn)流程的前提下）：根據(jù)纖維素酶、溶菌酶、脂肪酶等酶的相對(duì)分子量進(jìn)行分子篩層析或者其他的纖維素酶、溶菌酶、脂肪酶等酶的標(biāo)準(zhǔn)分離方法，分離出同等分子量的生物大分子，然后測(cè)定其生物活性。接著用用有關(guān)的特定的酶的特征的紅外、可見光、紫外光光譜、原子光譜分析進(jìn)行測(cè)定，尤其是這些酶有一些象NADH、FADH之類有機(jī)小分子輔基或輔酶或者含有有金屬離子時(shí)，后者用原子光譜分析。這樣基本上可以知道纖維素酶、溶菌酶、脂肪酶等酶在樣品中是否存在了，現(xiàn)在的有關(guān)酶試劑的商品說明一般可能查到常用的酶的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，也可以根據(jù)有關(guān)常用的酶的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，比如特征光譜、MS、HPLC、SDS PAGE電泳等完成檢測(cè)。 如果完全查不到有關(guān)的酶的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，而且檢測(cè)要求非常精確的做法，那么做法如下： 1.用HPLC或普通分子篩層析根據(jù)目的蛋白質(zhì)的相對(duì)分子量進(jìn)行分離，也可以根據(jù)酶的推薦使用的其他分離方法，比如離子交換層析、親和層析等分離出目的蛋白質(zhì)，為了更加精確，一般最好在用非HPLC的情況下應(yīng)該使用HPLC進(jìn)行一次完整蛋白質(zhì)的相對(duì)分子量鑒定或者用MS做一次分子量鑒定，同時(shí)也是鑒定純度，還可以用特征光譜、溶解法、SDS PAGE、WB等手段鑒定分離的蛋白質(zhì)的純度。一般這一步不要用肽譜分析，因?yàn)橛昧藰悠肪蛽p失了，后面檢測(cè)還要接著做。MS損失樣品很少。這步實(shí)驗(yàn)也盡量少用SDS PAGE或WB，因?yàn)镾DS PAGE回收的蛋白質(zhì)不一定都能復(fù)性，WB的蛋白質(zhì)則損失了，影響后面的酶活性的測(cè)定。 2.酶的生物活性的測(cè)定。這一步取目的酶的最適反應(yīng)條件。酶的生物活性的測(cè)定不要放在第一步，因?yàn)闃悠匪幁h(huán)境復(fù)雜，很可能目的酶的生活活性被抑制，不要第一步對(duì)于樣品檢測(cè)生物活性，發(fā)現(xiàn)沒有就此放棄。嚴(yán)格一些需要測(cè)定目的酶的比活性。 3.對(duì)于分離生物大分子對(duì)于此種生物大分子進(jìn)行有限酶水解（通常用胰蛋白酶），可以再對(duì)于各個(gè)水解片段進(jìn)行MS測(cè)定相對(duì)分子量；與此同時(shí)，用自動(dòng)測(cè)序儀測(cè)定N末端和C末端各測(cè)定連續(xù)的15個(gè)氨基酸左右的氨基酸序列，或者對(duì)于此種生物大分子進(jìn)行有限酶水解（水解酶視酶的相對(duì)分子量大小而定，不一定用胰蛋白酶，有必要的話可以用兩次不同的水解酶有限水解）后，分別對(duì)于兩個(gè)相鄰的水解片段分別用自動(dòng)測(cè)序儀測(cè)定序列和用MS測(cè)定相對(duì)分子量（對(duì)于同一次有限水解的每一個(gè)蛋白質(zhì)片段只做一次測(cè)定，或者測(cè)序或者做MS測(cè)定相對(duì)分子量），如果這些數(shù)據(jù)都符合數(shù)據(jù)庫(kù)中的與目的酶來源及類型完全相同的酶。 分離時(shí)目的產(chǎn)物酶時(shí)，一般不要根據(jù)纖維素酶、溶菌酶、脂肪酶等酶的相對(duì)分子量使用SDS PAGE電泳分離目的蛋白質(zhì)，因?yàn)镾DS PAGE回收的蛋白質(zhì)不一定都能復(fù)性；也盡量少用SDS PAGE或WB，WB的蛋白質(zhì)則損失了，這樣下一步就不能用生物活性方法測(cè)定是否存在目的酶。 有人可能可能認(rèn)為：根據(jù)纖維素酶、溶菌酶、脂肪酶等酶的相對(duì)分子量使用SDS PAGE電泳分離目的蛋白質(zhì)，雖然SDS PAGE回收的蛋白質(zhì)不一定都能復(fù)性，但是可以用沒有限水解后，分別測(cè)定相鄰水解片段的序列和相對(duì)分子量之一（對(duì)于同一次有限水解的每一個(gè)蛋白質(zhì)片段只做一次測(cè)定，或者測(cè)序或者做MS測(cè)定相對(duì)分子量）。實(shí)際上SDS PAGE已經(jīng)使得蛋白質(zhì)變性，而復(fù)性可能也不是完全，可以用CD和紅外傅立葉光譜同時(shí)檢測(cè)，折疊狀態(tài)即使有生活性也可能不是生理狀態(tài)的構(gòu)象，因此有限酶水解可能與天然酶不一樣，所以分別測(cè)定相鄰水解片段的序列和相對(duì)分子量之一（對(duì)于同一次有限水解的每一個(gè)蛋白質(zhì)片段只做一次測(cè)定，或者測(cè)序或者做MS測(cè)定相對(duì)分子量）得到的數(shù)據(jù)可能與數(shù)據(jù)實(shí)際不符，除非有數(shù)據(jù)庫(kù)中的數(shù)據(jù)就是這樣獲得的。 4.沒有條件做第三步實(shí)驗(yàn)，則建議用CD、紅外傅立葉光譜、熒光光譜、紫外可見光光譜同時(shí)檢測(cè)第一步分離出的產(chǎn)物的特征光譜，同時(shí)結(jié)合第二步酶活性測(cè)定。這些都是陽(yáng)性結(jié)果之后，再用SDS PAGE電泳或WB檢測(cè)一次，有條件可同時(shí)SDS PAGE電泳和WB，沒有條件，至少用一次SDS PAGE電泳。 |
5樓2014-07-09 09:51:13
凌波麗
專家顧問 (知名作家)
-
專家經(jīng)驗(yàn): +218 - BioEPI: 11
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.044
- 金幣: 2118.9
- 散金: 10
- 紅花: 208
- 帖子: 5633
- 在線: 571.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 1766465
- 注冊(cè): 2012-04-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)綜合
6樓2014-07-09 09:54:21
凌波麗
專家顧問 (知名作家)
-
專家經(jīng)驗(yàn): +218 - BioEPI: 11
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.044
- 金幣: 2118.9
- 散金: 10
- 紅花: 208
- 帖子: 5633
- 在線: 571.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 1766465
- 注冊(cè): 2012-04-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)綜合
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
monster_zeh: 金幣+10, ★★★★★最佳答案, 辛苦了 2014-07-09 10:21:14
monster_zeh: 金幣+10, ★★★★★最佳答案, 辛苦了 2014-07-09 10:21:14
|
查閱酶的活性方法，可以查：酶法分析手冊(cè)，德國(guó)人寫的一本書，80年代有中譯本，或者查：Hans Bisswanger,Practical Enzymolgy,Wily-VCH ,2004。也可以直接從蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)，比如PDB查出有關(guān)酶的各種信息，包括催化活性。 再說一遍：不能只根據(jù)混合物是否有目的酶的生物活性的存在，就斷定混合物中有有目的酶的存在。 |
7樓2014-07-09 09:59:25
polypro
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 197 (高中生)
- 金幣: 3921.3
- 散金: 160
- 紅花: 22
- 帖子: 512
- 在線: 62.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 1809438
- 注冊(cè): 2012-05-11
- 性別: GG
- 專業(yè): 理論和計(jì)算化學(xué)
8樓2014-07-09 11:20:02
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 monster_zeh 的主題更新
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求材料調(diào)劑 +8 | 隔壁陳先生 2026-03-12 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 294求調(diào)劑材料與化工專碩 +5 | 陌の森林 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
[考研] 一志愿吉林大學(xué)材料學(xué)碩321求調(diào)劑 +4 | Ymlll 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 344求調(diào)劑 +6 | knight344 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)工程321分求調(diào)劑 +15 | 大米飯！ 2026-03-15 | 18/900 |
|
|
|
[考研] 298-一志愿中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)-求調(diào)劑 +7 | 手機(jī)用戶 2026-03-17 | 7/350 |
|
|
|
[考博] 26博士申請(qǐng) +3 | 1042136743 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +4 | A_JiXing 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[碩博家園] 湖北工業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)與健康學(xué)院-課題組招收2026級(jí)食品/生物方向碩士 +3 | 1喜春8 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工專碩調(diào)劑 +5 | heming3743 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿，福州大學(xué)材料專碩339分求調(diào)劑 +3 | 木子momo青爭(zhēng) 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 藥學(xué)383 求調(diào)劑 +3 | 藥學(xué)chy 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 294求調(diào)劑 +3 | Zys010410@ 2026-03-13 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 255求調(diào)劑 +3 | 李嘉慧， 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +9 | Koxui 2026-03-12 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +3 | S.H1 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +3 | 李政瑩 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 070303一志愿西北大學(xué)學(xué)碩310找調(diào)劑 +3 | d如愿上岸 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +3 | ADT 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 福州大學(xué)楊黃浩課題組招收2026年專業(yè)學(xué)位博士研究生，2026.03.20截止 +3 | Xiangyu_ou 2026-03-12 | 3/150 |
|