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wenzi6337木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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[求助]
求助SMART RACE ，5‘-RACE問(wèn)題 已有4人參與
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| 如題，我在做SMART RACE時(shí)首先用隨機(jī)引物和通用引物合成cDNA，然后以cDNA為模板用Short2引物和CDS特異性引物擴(kuò)增，切膠回收500-700bp條帶，連pMD-18T載體測(cè)序，問(wèn)題是，測(cè)序結(jié)果顯示有片段連入，但不是我要找的CDS序列，請(qǐng)教各位大俠，是什么地方出了問(wèn)題？為什么CDS引物擴(kuò)出無(wú)關(guān)條帶？是引物特異性差嗎？請(qǐng)了解SMART RACE的大俠指點(diǎn)一二，不勝感激！ |
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wenzi6337
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4樓2014-07-09 13:59:51
Fleaves
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2樓2014-07-09 11:30:48
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wenzi6337: 金幣+10, ★★★很有幫助, 非常感謝啊！ 2014-07-09 14:01:18
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流經(jīng)驗(yàn)！ 2014-07-09 16:07:35
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流經(jīng)驗(yàn)！ 2014-07-09 16:07:35
| 為了保障你的RACE能夠特異性，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)多條引物，有種方法叫做 Asymetric PCR with nested primer。即，先用你的specific 引物1 單引物擴(kuò)增10-50個(gè)cycle，然后再用新的specific 引物2 （引物2的位置應(yīng)該在引物1的上游）和5‘ 末端引物進(jìn)行正常PCR擴(kuò)增。 祝好！ |
3樓2014-07-09 13:58:19
Neo2000
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5樓2014-07-09 19:25:08
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