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博克儂浮碼銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
怎樣用乙醇沉淀的方法純化酶切體系中的DNA 已有1人參與
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| 聽說乙醇沉淀法可以很好的純化單酶切體系中的DNA，希望能給出具體的方案！ |
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luwei13566
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
博克儂浮碼(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-07-24 09:35:32
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博克儂浮碼(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-07-24 09:35:32
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(1)加入1/10體積的3M 醋酸鈉（pH 5.2）于DNA溶液中，使其最終濃度為0.3 M。 (2)加入2.5倍體積無水乙醇混合后，置于-20度 中30~60分鐘(若DNA小于1kb或量比較少時(shí)，應(yīng)把溶液放在-70 下2小時(shí)，若DNA小于200 bp時(shí)，加入10 mM MgCl2 有助于DNA回收。) (3)12,000 rpm離心10分鐘，小心倒掉上清液，管底沉淀75%乙醇漂洗一遍 (4)12000 rpm離心10min，小心倒掉上清液，真空干燥，加入適當(dāng)?shù)腡E buffer或者水溶解。 (5)取1ul測(cè)定濃度，其余的分裝保存。 注意 1.你DNA的量越大乙醇沉淀效果越好，DNA的量越小損失率越大，甚至加了無水乙醇冰置后肉眼看不到沉淀 2.離心后倒上清不注意容易把沉淀也給倒出去導(dǎo)致最后啥也沒有 3.棄去上清和干燥不徹底，導(dǎo)致樣品中有乙醇干擾。 |
2樓2014-07-23 19:37:43
博克儂浮碼
銀蟲 (小有名氣)
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3樓2014-07-24 09:19:12
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