 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門版塊排行榜 |
- >論壇更新日志 (5774)
- >考研 (2811)
- >導(dǎo)師招生 (2612)
- >文獻(xiàn)求助 (487)
- >蟲(chóng)友互識(shí) (417)
- >碩博家園 (264)
- >考博 (169)
- >招聘信息布告欄 (150)
- >博后之家 (105)
- >休閑灌水 (97)
- >論文投稿 (87)
- >綠色求助(高懸賞) (61)
- >基金申請(qǐng) (53)
- >找工作 (48)
- >藥學(xué) (36)
- >SciFinder/Reaxys (34)
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2301 | 回復(fù): 24 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
ayouyiyi新蟲(chóng) (初入文壇)
|
[求助]
請(qǐng)幫忙分析一下，非常感謝~ 已有7人參與
|
|
|
各位好，小弟近來(lái)在做質(zhì)粒構(gòu)建，遇到一些問(wèn)題，請(qǐng)賜教~ 原始質(zhì)粒是從菌液里提出來(lái)的pET-28a；目的片段2200左右，上下游引物5'端分別加的是Bamh I和Ecor I的酶切位點(diǎn)，然后也都加好了Neb那張表格的保護(hù)堿基，都加了3個(gè)保護(hù)堿基，PCR條帶也都正確，并割膠回收。 然后，質(zhì)粒和目的片段37度4h雙酶切，酶切體系12ul DNA；2ul Buffer K；4.4ul ddH20；0.8ul Bamh I；0.8ul Ecor I，電泳如圖1，最左面的是2000的Marker，最右面的是原始質(zhì)粒。 接著割膠回收，如圖2，取割膠回收6.5ul 目的片段和1.5ul 質(zhì)粒，再加1ul buffer和1ul 連接酶，16度連接20個(gè)小時(shí)，然后就做轉(zhuǎn)化，感受態(tài)效率還可以，明天過(guò)來(lái)，長(zhǎng)了30個(gè)左右，晚上接菌，并且在抗生素的培養(yǎng)基里都長(zhǎng)了。 但是今天提質(zhì)粒又是沒(méi)提出來(lái)，已經(jīng)做了好幾次了，這是為什么？試劑盒、限制酶和連接酶都是用的Takara的。 看了原始質(zhì)粒pET-28a的Bamh I和Ecor I的酶切位點(diǎn)是緊挨著的，是不是不能雙酶切？ 請(qǐng)不吝賜教，非常感謝~ 雙酶切產(chǎn)物.gif 雙酶切割膠回收.gif |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有188人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 請(qǐng)大家?guī)兔Ψ治鲆幌拢〉诙瓮陡�，AE給reject，主編給major revision.
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 求各位大神幫忙解釋一下審稿人的評(píng)論，小碩不太理解，非常感謝~~~
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 求絲網(wǎng)印刷的蟲(chóng)友們幫忙分析一下，非常感謝
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 本人譜圖菜鳥(niǎo)，各位大神幫幫我解析一下是不是目標(biāo)化合物，非常感謝！急
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 各位前輩，幫忙分析下，導(dǎo)師這樣回復(fù)是什么意思，萬(wàn)分感激
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 請(qǐng)幫忙分析一下，該用什么材料，什么熱處理方式
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 求助求助，急啊，請(qǐng)各位蟲(chóng)友幫忙翻一下評(píng)審的這句話，非常感謝
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 請(qǐng)有經(jīng)驗(yàn)的哥哥姐姐幫忙看一下這段英文，非常感謝。
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 新手一枚，大家?guī)兔Ψ治鲆幌挛业母咝б合鄨D譜。O(∩_∩)O謝謝
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 麻煩各位蟲(chóng)友幫忙解析一下 3.29 處是什么出峰，非常感謝~~
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 請(qǐng)幫忙分析下XRD數(shù)據(jù)，這兩天軟件出問(wèn)題，只分析了一半。非常緊急！十分感謝！
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 想查看自己的賬戶和密碼，幫忙分析一下這是什么情況？
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 請(qǐng)高手幫忙分析一下SiO2-Al2O3的TG-DTA曲線，非常感謝！
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 幫忙分析一下這幾個(gè)響應(yīng)面的圖
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 這個(gè)GC太詭異了，大家?guī)兔Ψ治鱿略�，感謝。。。
已經(jīng)有21人回復(fù)
- 求大家?guī)兔Ψ治鱿逻@個(gè)CV曲線吧
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 剛投就被拒稿，請(qǐng)高手幫忙分析一下
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 幫忙分析一下這個(gè)tafel曲線，急~~~謝謝！
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 幫忙分析一下PDMAEMA的TGA圖
已經(jīng)有3人回復(fù)
- synthetic metals 投稿，審稿意見(jiàn)， 請(qǐng)各位幫忙分析一下！
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 請(qǐng)幫忙分析一下，謝謝
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助】幫忙分析下I-V曲線
已經(jīng)有26人回復(fù)
- 【求助】請(qǐng)高手幫忙分析一下這張固化DSC曲線圖，非常感謝
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 【求助】幫忙比較一下幾種化合物氧化性強(qiáng)弱關(guān)系，非常感謝！
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【求助】看不懂文章極圖分析，請(qǐng)幫忙解釋一下！(圖片已能顯示)
已經(jīng)有12人回復(fù)
luwei13566
木蟲(chóng) (正式寫手)
- MolEPI: 3
- 應(yīng)助: 184 (高中生)
- 金幣: 4351.4
- 散金: 97
- 紅花: 35
- 帖子: 641
- 在線: 261.1小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2380655
- 注冊(cè): 2013-03-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
★ ★
ayouyiyi(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-08-03 19:05:16
ayouyiyi(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-08-03 19:05:16
|
1.如果提質(zhì)粒酶問(wèn)題那就好好篩查一下你的氨芐吧。。。就拿你這次做的感受態(tài)細(xì)胞接種到你抗性培養(yǎng)基里試試長(zhǎng)不長(zhǎng)菌。 2.我們實(shí)驗(yàn)室不用28a，選哪個(gè)酶切位點(diǎn)關(guān)鍵要看你需要連接的片段序列，要不是序列里有切點(diǎn)你也不會(huì)選兩個(gè)愛(ài)一起的酶切位點(diǎn)做切割吧。。 |
ayouyiyi
8樓2014-08-02 23:38:34
yuzhiming
捐助貴賓 (知名作家)
- MolEPI: 2
- 應(yīng)助: 49 (小學(xué)生)
- 金幣: 18071.4
- 散金: 4225
- 紅花: 10
- 帖子: 7776
- 在線: 1218.1小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 48471
- 注冊(cè): 2004-06-19
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物學(xué)研究的新技術(shù)、新方
2樓2014-08-02 14:27:25
ayouyiyi
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1498.5
- 帖子: 14
- 在線: 14.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1946251
- 注冊(cè): 2012-08-19
- 專業(yè): 食品加工技術(shù)
3樓2014-08-02 15:53:34
luwei13566
木蟲(chóng) (正式寫手)
- MolEPI: 3
- 應(yīng)助: 184 (高中生)
- 金幣: 4351.4
- 散金: 97
- 紅花: 35
- 帖子: 641
- 在線: 261.1小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2380655
- 注冊(cè): 2013-03-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
ayouyiyi(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-08-02 17:29:20
ayouyiyi: 金幣+20, ★★★很有幫助 2014-08-02 20:14:42
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
ayouyiyi(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-08-02 17:29:20
ayouyiyi: 金幣+20, ★★★很有幫助 2014-08-02 20:14:42
|
1.你篩選平板上長(zhǎng)的轉(zhuǎn)化子是壓根沒(méi)提出來(lái)質(zhì)粒還是里面有質(zhì)粒只不過(guò)是空載的？ 2.質(zhì)粒上兩個(gè)酶切位點(diǎn)挨著確實(shí)比一般的難切，但不是切不開(kāi)，需要延長(zhǎng)切割時(shí)間或者分步酶切。 3.從電泳圖上看你的基因濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。割膠回收后檢測(cè)連條帶都沒(méi)了，一是你酶切的基因和載體太少，回收前得多切幾管，其次你膠回收率太低，可以用PCR產(chǎn)物純化代替割膠回收，最后純化后的基因和載體最好要檢測(cè)濃度，基因載體摩爾比不好自然影響連接效率 |
4樓2014-08-02 17:02:04
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +3 | Amber00 2026-03-31 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 086000調(diào)劑 +5 | 7901117076 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 080500-315分復(fù)試調(diào)劑 +9 | 上岸3821 2026-03-31 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 315求調(diào)劑 +6 | akie... 2026-03-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 08工科，295，接受跨專業(yè)調(diào)劑 +4 | lmnlzy 2026-03-31 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué) 296 求調(diào)劑 +7 | 朵朵- 2026-03-26 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +10 | 舊吢 2026-03-24 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | 圖鑒212 2026-03-30 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 282求調(diào)劑 +3 | 呼吸都是減肥 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 370求調(diào)劑 +3 | 080700調(diào)劑 2026-03-30 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +17 | 田洪有 2026-03-26 | 18/900 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +8 | 星野? 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京工業(yè)大學(xué)，324分求調(diào)劑 +6 | 零八# 2026-03-28 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 壓國(guó)家一區(qū)線，求導(dǎo)師收留，有恩必謝！ +7 | 迷人的哈哈 2026-03-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 081200-314 +3 | LILIQQ 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 086502化學(xué)工程342求調(diào)劑 +6 | 阿姨復(fù)古不過(guò) 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 315分求調(diào)劑 +7 | 26考研上岸版26 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分調(diào)劑 +4 | 大饞小子 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 打過(guò)很多競(jìng)賽，085406控制工程300分，求調(diào)劑 +3 | askeladz 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料專碩 335 分求調(diào)劑 +4 | 拒絕冷暴力 2026-03-25 | 4/200 |
|