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動(dòng)物腸道內(nèi)容物細(xì)菌總DNA提取后，是否需要統(tǒng)一DNA濃度，再PCR
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請(qǐng)問各位大神： 我提取了動(dòng)物腸道內(nèi)容物中微生物總DNA，經(jīng)檢測(cè)A260/A280都在1.7-1.8左右。濃度10-40 ng/ul 差別較大。待檢測(cè)的微生物特異性引物已經(jīng)訂購(gòu)到了。下一步我要做相對(duì)定量RT-PCR，雙△法，每個(gè)組都與對(duì)照組作比較。我想知道這么多分組并且不同時(shí)期的腸道菌群DNA濃度是否需要將濃度都調(diào)整到一樣，再進(jìn)行擴(kuò)增？這樣的情況下最終的循環(huán)數(shù)才能有意義，要是一開始加的DNA 都不一樣多，循環(huán)數(shù)多少有什么意義呢？如果我加一樣濃度的總DNA，那每種細(xì)菌的DNA 濃度又沒有辦法檢測(cè)到讓其統(tǒng)一，即使總DNA濃度一樣有什么用呢？ 求各位大神幫幫忙？我快糊涂死了，是我對(duì)PCR的原理理解有誤嗎？ |
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2樓2019-05-19 13:12:23
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