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微生物gDNA瓊脂糖凝膠電泳，問題 已有3人參與
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瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果，如附件： 問題：1、樣品1出現(xiàn)這中情況，有沒有可能是上樣量太大？ 2、樣品2無條帶？ 3、膠出現(xiàn)一半白一半稍黑的現(xiàn)象，是因?yàn)橹颇z時膠槽沒有放平？ 先謝謝了。 1.PNG |
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1,膠凝固30min. 我看過你發(fā)的帖子，說膠要薄，這個薄是不超過哦5mm嗎？ 2、gDNA在23kb左右。上樣量：5ul樣品+1ul Loading Buffer。樣品1微生物數(shù)量E+9,樣品量2微生物數(shù)量在E+2~E+3，洗脫的時候，樣品1用了100ul Buffer AE，樣品2則用了50ul。 3、樣品1出現(xiàn)這樣的情況，是降解了嗎？我提取的是肉中微生物的gDNA。樣品2泳道出現(xiàn)霧狀白色物質(zhì)，是上樣時飄洋？ 4、Marker 條帶彎彎的，月亮狀態(tài)，這是？ 5、附件是我之前做的，并沒有出現(xiàn)一半白一半黑，核酸染料是Goldview I。 2.PNG |
8樓2014-08-21 15:18:16
2樓2014-08-20 21:08:17
3樓2014-08-21 09:13:47
鬼羽帝魂
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4樓2014-08-21 10:29:19
5樓2014-08-21 10:37:37
鬼羽帝魂
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6樓2014-08-21 11:39:25
gyesang
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1. 從你的膠來看，你的膠沒有充分凝固好，膠倒完要凝固至少30min，樣品1中提取的DNA質(zhì)量還算可以，一半基因組DNA分子量都比較大，所以會集中在膠的上部，減少上樣量，膠可能跑的會更好看 2. 泳道2的確是沒有提出DNA，可能是在提取過程中DNA降解了 3. 膠一半白一半黑，我猜你用的是EB染料，EB帶正電，電泳時會向正極移動，所以下面的EB往上跑了就會顯得不亮，如果你用的是其他染料，如果染料帶電的話，也會出現(xiàn)這種情況 |
7樓2014-08-21 12:30:06
9樓2014-08-21 15:30:40
gyesang
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WSXP1104: 金幣+5, ★★★很有幫助 2014-08-21 17:19:22
WSXP1104: 金幣+5, ★★★很有幫助 2014-08-21 17:19:22
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1. 膠的厚薄根據(jù)你的梳子調(diào)整，薄膠大概1/3梳齒深，也即梳子的齒1/3插在膠中 2. 樣品1，提的還好，gDNA可用，樣品2沒有提到DNA或者DNA降解 3. 泳道1，不一定是降解，小片段DNA的產(chǎn)生也可能是你在提取過程的機(jī)械損傷，這個是避免不了的，樣品2前端是降解中的RNA，不是漂樣 4. 膠要煮透，然后膠要充分凝固，減少上樣量(Marker也是) 5. http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=3771137 8樓前西瓜版主的回答 "和EB一樣，GoldView電泳時會向負(fù)極移動（膠孔方向），所以電泳之后，靠近膠孔那邊的背景會更亮，而另一半的膠背景會比較暗，這個是正常現(xiàn)象，不影響結(jié)果的。" |
10樓2014-08-21 16:00:49
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