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wwwpengcs銅蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
我的JM109-pKD46質(zhì)粒的電擊感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率怎么一直都提不上去呢 已有3人參與
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| 大家好，我最近在做JM109菌株的敲除實(shí)驗(yàn)，JM109內(nèi)導(dǎo)入了一個(gè)pKD46質(zhì)粒，用10%的甘油洗了兩次。制作感受態(tài)的一些基本方面都注意到了，因?yàn)槲抑白隽撕芏嚯姄襞c熱擊的感受態(tài)，熱擊的感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率一直都非常高。我檢測(cè)我的感受態(tài)的轉(zhuǎn)化率是直接導(dǎo)入了一個(gè)與pKD46（氨芐抗性）質(zhì)粒兼容的pET-30a(卡納抗性）質(zhì)粒，用雙抗板來(lái)檢測(cè)。但是每次導(dǎo)入pET-30a質(zhì)粒后，雙抗板上要么是沒(méi)有長(zhǎng)出菌，要么是染了少許雜菌。pKD46質(zhì)粒的復(fù)制子是R101，pET-30a的復(fù)制子是pBR322�？梢钥隙ǖ氖牵@兩個(gè)質(zhì)粒是完全可以兼容的。做了一年，實(shí)驗(yàn)卡在這了，求知道的高手能夠幫我好心解答一下下~~~（金幣不多額，因?yàn)檫@是注冊(cè)3年來(lái)在蟲(chóng)蟲(chóng)上發(fā)的第一個(gè)帖） |
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7樓2015-02-05 00:12:57
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2樓2014-08-25 16:11:27
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3樓2014-08-25 21:01:22
張凡云
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【答案】應(yīng)助回帖
| 我想問(wèn)的是，你能夠用化學(xué)轉(zhuǎn)化的方法去檢測(cè)電轉(zhuǎn)感受態(tài)？我做得是Ecoli.K12-MG1655含pKD46的電轉(zhuǎn)感受態(tài)，制作了3次感受態(tài)，第一次長(zhǎng)了2個(gè)，第二次1個(gè)，第3次長(zhǎng)得就多了，我感覺(jué)是要控制好OD600的值，在誘導(dǎo)pKD46的時(shí)候，那個(gè)值最好是在0.2~0.25之間，而最后的OD600值，不要超過(guò)0.55，還有就是你搖菌時(shí)，瓶里的溶氧量，一般是用500ml的培養(yǎng)瓶，搖100ml LB，希望對(duì)你有用。 |
4樓2015-02-03 00:46:45
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