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danlv木蟲 (小有名氣)
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[求助]
pET28a和pETDuet兩個載體的表達強度，哪個更大？ 已有1人參與
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假設：用pET28a載體單獨表達A基因，用pETDuet載體表達A和B基因，兩個載體分別在BL21(DE3)中誘導表達。 pET28a-A的表達強度是不是要比pETDuet-A-B中A的表達強度更大呢？ 單獨比較表達蛋白量的話，pET28a-A的中的A蛋白量與pETDuet-A-B中AB蛋白量之和哪個更大呢？ |
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alicelchf
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danlv(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2014-08-28 21:59:38
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danlv(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2014-08-28 21:59:38
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一個Promoter可以控制多個蛋白的轉錄。但是能控制多長要看Promoter的強度，在PKS的基 因中，一個promoter控制十幾個蛋白的表達是很正常的。 stop codon是在翻譯這個環(huán)節(jié)來決定蛋白的終止跟promoter控制的轉錄是分子生物學中兩個不同 的事件。 簡單一點說，promoter是負責DNA變成mRNA的，如果如夠強的promoter, 使連續(xù)3-5個基因發(fā)生轉錄是一點問題都沒有的。 比如pET28, 我們在NdeI和XhoI位點克隆一個基因，在基因的后面引入一個SpeI位點，我可以將另一個已 經(jīng)在pET28的基因用XbaI和SpeI切下來克隆到前一個克隆的SpeI位點上。 這樣我就得到了兩個基因先后被promoter T7控制。 但是每個基因有自己的RBS(ribosome binding site）和stop Codon, 在翻譯的時候核糖體會識別這一頭一尾兩個位點，表達出兩個蛋白。 強度肯定是越排在后面的越弱，但是每個蛋白翻譯的速率和半衰期不一樣，表達出的量也不 是完全絕對。 當然你也可以每一個蛋白前放一個promoter，最好是不同的，但是如果是同一個promoter， 它們很容易發(fā)生重組，造成不穩(wěn)定。 |
7樓2014-08-28 12:17:35
charles08
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danlv
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alicelchf
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6樓2014-08-28 12:16:24
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8樓2014-08-28 19:40:06
charles08
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10樓2014-08-30 11:52:26
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