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danlv木蟲 (小有名氣)
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[求助]
pET28a和pETDuet兩個(gè)載體的表達(dá)強(qiáng)度，哪個(gè)更大？ 已有1人參與
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假設(shè)：用pET28a載體單獨(dú)表達(dá)A基因，用pETDuet載體表達(dá)A和B基因，兩個(gè)載體分別在BL21(DE3)中誘導(dǎo)表達(dá)。 pET28a-A的表達(dá)強(qiáng)度是不是要比pETDuet-A-B中A的表達(dá)強(qiáng)度更大呢？ 單獨(dú)比較表達(dá)蛋白量的話，pET28a-A的中的A蛋白量與pETDuet-A-B中AB蛋白量之和哪個(gè)更大呢？ |
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alicelchf
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danlv(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-08-28 21:59:38
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一個(gè)Promoter可以控制多個(gè)蛋白的轉(zhuǎn)錄。但是能控制多長(zhǎng)要看Promoter的強(qiáng)度，在PKS的基 因中，一個(gè)promoter控制十幾個(gè)蛋白的表達(dá)是很正常的。 stop codon是在翻譯這個(gè)環(huán)節(jié)來決定蛋白的終止跟promoter控制的轉(zhuǎn)錄是分子生物學(xué)中兩個(gè)不同 的事件。 簡(jiǎn)單一點(diǎn)說，promoter是負(fù)責(zé)DNA變成mRNA的，如果如夠強(qiáng)的promoter, 使連續(xù)3-5個(gè)基因發(fā)生轉(zhuǎn)錄是一點(diǎn)問題都沒有的。 比如pET28, 我們?cè)贜deI和XhoI位點(diǎn)克隆一個(gè)基因，在基因的后面引入一個(gè)SpeI位點(diǎn)，我可以將另一個(gè)已 經(jīng)在pET28的基因用XbaI和SpeI切下來克隆到前一個(gè)克隆的SpeI位點(diǎn)上。 這樣我就得到了兩個(gè)基因先后被promoter T7控制。 但是每個(gè)基因有自己的RBS(ribosome binding site）和stop Codon, 在翻譯的時(shí)候核糖體會(huì)識(shí)別這一頭一尾兩個(gè)位點(diǎn)，表達(dá)出兩個(gè)蛋白。 強(qiáng)度肯定是越排在后面的越弱，但是每個(gè)蛋白翻譯的速率和半衰期不一樣，表達(dá)出的量也不 是完全絕對(duì)。 當(dāng)然你也可以每一個(gè)蛋白前放一個(gè)promoter，最好是不同的，但是如果是同一個(gè)promoter， 它們很容易發(fā)生重組，造成不穩(wěn)定。 |
7樓2014-08-28 12:17:35
charles08
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danlv
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6樓2014-08-28 12:16:24
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-08-28 21:28:12
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-08-28 21:28:12
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8樓2014-08-28 19:40:06
charles08
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10樓2014-08-30 11:52:26
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