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[求助]
QPCR溶解曲線問題 已有2人參與
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各位好： 最近做對一個基因做驗(yàn)證QPCR實(shí)驗(yàn)，擴(kuò)增曲線顯示幾乎沒有擴(kuò)增，溶解曲線如下，前面一部分比較高，溶解峰看起來也還好，不知道是什么原因？ Melt Curve.jpg |
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zhangyunjing
金蟲 (小有名氣)
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3樓2014-08-28 15:49:17
★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2014-08-28 18:02:40
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2014-08-28 18:02:40
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是SYBR相對定量嗎？ 先說說擴(kuò)增曲線，只能說明你的起始模版不夠，或者引物擴(kuò)增效率太低（可能退火穩(wěn)定引起也可能本身引物不好），說明你沒有做普通PCR摸條件驗(yàn)證，一般30個循環(huán)跑電泳看不到清晰的條帶肯定不行。 其次看你的溶解曲線，后面Tm85 說明你的條帶應(yīng)該擴(kuò)出來了，并且重在一起，應(yīng)該是你的目的片段。但前面那么高的峰，可能是你的引物一開始就是二聚體，后面才慢慢分開擴(kuò)增片段。你跑個膠看看有沒有引物！ |
2樓2014-08-28 13:50:36
4樓2014-08-28 16:54:11
5樓2014-08-28 16:55:35
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