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shxteacher鐵桿木蟲 (正式寫手)
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[交流]
PYD1重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化釀酒酵母后為什么長(zhǎng)出的陽(yáng)性斑PCR擴(kuò)不出目的片段？ 已有1人參與
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跟別人交換了pYD1釀酒酵母質(zhì)粒，按照pYD1的操作手冊(cè)，將目的基因連接至pYD1，構(gòu)建好了重組質(zhì)粒，并測(cè)序驗(yàn)證正確。 然后木有線性化（根據(jù)操作手冊(cè)中的描述，不需要線性化），直接轉(zhuǎn)入EBY100釀酒酵母感受態(tài)細(xì)胞中， 用Trp-（色氨酸缺陷）平板篩選，能長(zhǎng)出粉色菌落，本人不知道是否正確？但是EBY100感受態(tài)細(xì)胞無法在trp-平板上長(zhǎng)出菌落。 然后挑取單菌落，轉(zhuǎn)至trp-液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)物離心后，依舊是粉色培養(yǎng)物。 但是用試劑盒提取基因組后，卻無法PCR得到我目的基因片段，為什么PCR不出來？ （pYD1釀酒酵母質(zhì)粒 和 EBY100均是跟別人換來的） 不知道各位科研同仁遇到這樣的情況木有？ 請(qǐng)各位大蝦給點(diǎn)指點(diǎn)，實(shí)在想不通，萬分感謝。 pYD1重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化后的粉色菌落.png |
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2樓2014-08-29 18:42:37
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3樓2014-08-29 18:42:55
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4樓2014-08-29 18:43:03
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6樓2014-08-29 18:43:39
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7樓2014-08-29 18:48:25
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8樓2014-08-29 18:48:34
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9樓2014-08-29 18:48:44
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10樓2014-08-29 18:48:53
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