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[求助]
3端RACE換了兩次引物了，擴(kuò)出來(lái)的都是同一種病毒，求高手給指點(diǎn)一下，不勝感激！
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| 最近做一個(gè)基因的全長(zhǎng)，3端RACE擴(kuò)出來(lái)的條帶經(jīng)切膠回收，克隆后測(cè)序，Blast相似度高的是一種病毒，換了兩次引物了，都是同一種病毒，這個(gè)病毒是我們研究的這個(gè)昆蟲(chóng)體內(nèi)的一種特有病毒。這種結(jié)果，應(yīng)該是引物不好，特異性擴(kuò)增了，但我不解的是：為什么兩次不同的引物恰好擴(kuò)的都是這個(gè)病毒？難道是這個(gè)病毒的基因整合到昆蟲(chóng)體內(nèi)了？求高手給指點(diǎn)一下，不勝感激！迷茫了，做了好久的RACE，快失去信心了！ |
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喜氣洋洋
金蟲(chóng) (初入文壇)
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2樓2014-08-30 20:58:42
3樓2014-08-30 23:07:43
4樓2014-08-31 10:21:14
5樓2014-08-31 10:22:46
【答案】應(yīng)助回帖
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青青草allan: 金幣+5 2014-08-31 10:57:17
青青草allan: 金幣+18 2014-08-31 10:57:32
青青草allan: 金幣+5 2014-08-31 10:57:17
青青草allan: 金幣+18 2014-08-31 10:57:32
| 你自己的特意性引物，在外側(cè)引物里面再設(shè)計(jì)一條，通用引物用他的，將第一次PCR的結(jié)果稀釋100倍取1微升作為模版使用內(nèi)側(cè)引物（最好和外側(cè)引物間隔200bp左右，跑膠的時(shí)候好檢測(cè)）和通用引物（Smart RACE里面有一條短的）進(jìn)行第二輪PCR |
6樓2014-08-31 10:38:19
7樓2014-08-31 10:57:02
8樓2014-08-31 21:30:19
9樓2014-09-01 10:19:19
yuguiyan
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10樓2016-06-09 21:25:52
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