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dwhhzhang捐助貴賓 (正式寫手)
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[求助]
ELISA檢測(cè)蛋白相互作用。
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各位大俠，救命啊。鄙人用ELISA檢測(cè)蛋白質(zhì)相互作用，就是測(cè)不出來。我的protocol如下： 1 Coat the microplate with the first protein at 37℃ for 3 h ; 2 Block the plate with 3% BSA at 37℃ for 2 h; 3 The second protein with GST-tag was added to each well, incubated for 2 h at 37℃, then wash twice with PBS ; 4 Add anti-GST Biotin conjugated (diluted 1:1000) in PBS-0.05% Tween-20, and incubated at 37℃ for 1 h, and then washed three times in PBS-0.05% Tween-20; 5 Add Streptavidin conjugated Alkaline Phosphatase in PBS-0.05% Tween-20,and incubated at 37℃ for 1 h, and then washed three times in PBS-0.05% Tween-20; 6 The color reaction was developed with p-NPP. 7 Stop the reaction and teh absorbance was read by a microplate reader at 405nm. 似乎蛋白之間的相互作用很弱，經(jīng)不起折騰，有哪位大俠有成功經(jīng)驗(yàn)或好的建議，幫幫我吧。另外，我現(xiàn)在只能用ELISA，其他方法條件不具備。 跪謝了！ |
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2012chen
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