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五維度的愛(ài)金蟲(chóng) (小有名氣)
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分子克隆連接驗(yàn)證問(wèn)題 已有4人參與
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| 最近把所克隆的目的基因連接到pET-28a載體上，轉(zhuǎn)化后挑菌用載體的通用引物驗(yàn)證不出來(lái)，但用特異性的引物能夠驗(yàn)證出目的基因，但測(cè)序時(shí)總是無(wú)信號(hào)，這個(gè)該怎么解？ |
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2樓2014-09-09 12:52:49
huyan0817
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【答案】應(yīng)助回帖
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| 樓主測(cè)序的時(shí)候用的通用引物還是特異性引物???如果是通用引物那就正常了,你用通用引物沒(méi)有P出來(lái)，再測(cè)序也有問(wèn)題，有可能是pET-28a載體有問(wèn)題！樓主可以用雙酶切產(chǎn)物或則特異性引物的PCR產(chǎn)物去測(cè)序，如果正確說(shuō)明你目的片斷連接上去了，但是你的載體有問(wèn)題，那就只能從新弄個(gè)載體從新連接了！ |
3樓2014-09-09 13:08:03
4樓2014-09-09 16:03:43
5樓2014-09-09 16:05:07
五維度的愛(ài)
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6樓2014-09-09 20:53:33
jinshengfang
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7樓2014-11-05 19:38:51
8樓2014-11-05 21:05:10
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