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五維度的愛金蟲 (小有名氣)
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分子克隆連接驗(yàn)證問題 已有4人參與
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| 最近把所克隆的目的基因連接到pET-28a載體上，轉(zhuǎn)化后挑菌用載體的通用引物驗(yàn)證不出來(lái)，但用特異性的引物能夠驗(yàn)證出目的基因，但測(cè)序時(shí)總是無(wú)信號(hào)，這個(gè)該怎么解？ |
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木蟲 (正式寫手)
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huyan0817
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
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五維度的愛: 金幣+1, ★有幫助 2014-09-09 20:51:13
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| 樓主測(cè)序的時(shí)候用的通用引物還是特異性引物???如果是通用引物那就正常了,你用通用引物沒有P出來(lái)，再測(cè)序也有問題，有可能是pET-28a載體有問題！樓主可以用雙酶切產(chǎn)物或則特異性引物的PCR產(chǎn)物去測(cè)序，如果正確說明你目的片斷連接上去了，但是你的載體有問題，那就只能從新弄個(gè)載體從新連接了！ |
3樓2014-09-09 13:08:03
4樓2014-09-09 16:03:43
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