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[求助]
走過路過的大俠幫忙啊-----重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化后抽提質(zhì)粒濃度低 已有3人參與
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| 請問各位大俠，我將目的片段和載體，雙酶切（快切）20min，跑膠檢驗(yàn)沒問題后連接轉(zhuǎn)化，然后挑取一些菌株活化抽提質(zhì)粒，檢測出來質(zhì)粒濃度20-30ng/ul,不知道是為什么，請各位走過路過的大俠指點(diǎn)迷津！�。。。。�！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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你這個問題可以從兩方面來考慮： 首先，不知道樓主有沒有檢測抽提出來的質(zhì)粒是否為所需的質(zhì)粒（可以PCR鑒定和酶切鑒定），如果是，那么說明之前的酶切、連接、轉(zhuǎn)化是沒有問題的，那么問題就出來抽提質(zhì)粒上，可能的原因有兩個，一是菌的問題，即濃度太低或者或者質(zhì)粒兼容性不好，前者解決辦法就是加長搖菌時間，后者解決辦法就是換感受態(tài)菌株，重新轉(zhuǎn)化； 第二，如果檢測結(jié)果表明所抽提核酸（可能是混進(jìn)的菌株基因組DNA或者RNA）不是所需質(zhì)粒，那么問題就在酶切、連接、轉(zhuǎn)化上了，建議逐一排查各步可能出現(xiàn)的問題，方法就是加進(jìn)陰性對照和陽性對照。 個人見解，僅供參考 |
3樓2014-09-16 22:12:46
youlinglyw
榮譽(yù)版主 (著名寫手)
一匡天下
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2樓2014-09-16 21:09:23
4樓2014-09-17 08:56:50
5樓2014-09-17 08:59:37
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